【摘 要】
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目的研究特异性抗HPV16E6核酶对宫颈癌细胞表型和基因表达的影响.方法应用计算机软件设计抗HPV16E6核酶,并以体外切割实验验证其效率.以脂质体法将抗HPV16 E6核酶、空载体质
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目的研究特异性抗HPV16E6核酶对宫颈癌细胞表型和基因表达的影响.方法应用计算机软件设计抗HPV16E6核酶,并以体外切割实验验证其效率.以脂质体法将抗HPV16 E6核酶、空载体质粒分别导入CaSKi细胞,命名为CaSKi-R、CaSKi-P细胞.点杂交检测核酶在细胞中的表达,Northern杂交检测细胞中E6基因的表达.测定三种细胞的生长曲线和软琼脂克隆形成率,检测其在裸鼠体内的成瘤能力.流式细胞仪检测三种细胞的凋亡率,并测定c-myc、bcl-2、p53、fas蛋白的表达.检测三种细胞表面抗原的表达,包括HLA-1、HL A-2、B7-1、B7-2.诱导NK、LAK、CD3AK细胞,测定它们对三种宫颈癌细胞的杀伤作用. 结果体外切割实验证实抗HPV16E6核酶能特异性切割靶基因,点杂交证明核酶能在CaSKi-R细胞中稳定表达,Northern杂交显示CaSKi-R中表达E6较CaSKi-P、CaSKi明显降低.与CaSKi细胞相比,CaSKi-R细胞生长速度、软琼脂克隆形成率明显降低,在裸鼠体内的成瘤性降低, 凋亡率明显增高.而CaSKi-P细胞无此改变.核酶的导入使CaSKi-R细胞表达HPV16E6、c- myc、bcl-2蛋白明显减少,而表达p53明显增高.CaSKi-R细胞中HLA-2、B7-1、B7-2抗原表达增高.NK、LAK、CD3AK细胞对CaSKi-R的杀伤作用明显高于对CaSKi细胞.结论抗HPV16E6核酶不但能部分逆转宫颈癌CaSKi细胞的恶性表型,而且能诱导CaSKi细胞凋亡, 提高其对免疫细胞的敏感性.
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