探讨新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后脑内u-calpain的活化、其他相关因子表达变化的时程及相互关系,进一步研究HIBD的发病机制。
方法HIBD模型采用改良的Rice法。应用Western blot法半定量测定缺氧缺血(HI)后0、1、2、4、12和24h大脑皮层和海马u-calpain、c-Fos、c-Jun、HSP70和HSP27的表达。蛋白浓度测定采用改良的Bradford法。
结果新生大鼠HI后u-calpain裂解为76和80两个片段,两者比值在HI后显著提高,以海马更为明显,其中皮层在24h、海马在12h达到高峰。c-Fos在HI后2~12h海马显著高于皮层(P<0.05),24h海马却低于皮层(P<0.05);c-Jun则0~1h海马高于皮层(P<0.05),4h以后皮层均高于海马(P<0.05)(其中12h差异无显著意义)。c-Fos和c-Jun在HI后呈上升趋势,无论皮层或海马均在2~4h达到高峰,以后渐下降,但24h仍高于正常对照组。与对照组相比,c-Fos在1,2,4,12和24h差异有显著意义(P<0.05);c-Jun在0,1,2,4,12和24h差异有显著意义(P<0.05)。HSP70在HI后0h皮层显著高于海马(P<0.05),1h海马显著高于皮层(P<0.05),4h后皮层又均高于海马(P<0.05);HSP27则HI后1~24h海马均显著高于皮层(P<0.05)。HI后HSP70和HSP27亦呈上升趋势,在12或24h达到高峰。与对照组相比,HSP70在12和24h差异有显著意义(P<0.05);而HSP27皮层在24h、海马在12和24h差异有显著意义(P<0.05)。多元线性逐步回归分析表明,u-calpain的活化同HSP27和HSP70密切相关。
结论HIBD是个复杂的病理过程,多种变化和机制并存。HI激活calpain、诱导c-Fos和c-Jun的表达,引起细胞的程序性死亡;同时启动自身保护机制,如HSP70和HSP27的诱导表达。