论文部分内容阅读
[摘 要]目的：分析微量脱落细胞DNA检验方法，以寻找提高检材DNA检出率的有效方法。方法：选用实验室收集的780份脱落的细胞类检材作为研究对象，采用5075结合磁珠法和手工硅珠法作为研究方法，比较两种方法的检出率。结果：三类检材中，皮肤长期接触类检材的检出率最高；5075结合磁珠法的检出率为13.90%，手工硅珠法的检出率为28.95%，手工硅珠法优于5075结合磁珠法；随着检验时限的延长，两种方法的检出率都在逐渐下降，且每个时限内的手工硅珠法的检出率均优于5075结合磁珠法。结论：手工硅珠法的检出率高于5075结合磁珠法，更具有推广和应用的价值。
[关键词]微量；脱落细胞；DNA检验方法
中图分类号：S652 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2018）08-0251-01
随着微量脱落细胞DNA检验方法的不断应用和发展，其检验结果在案件的侦破、起诉及审判中发挥的作用越来越明显。文章主要对微量脱落细胞DNA检验方法进行了比较研究，希望能为相关人士提供一定参考。
1 材料与方法
1.1 检材
如表1所示，本文研究选用实验室收集的780份脱落的细胞类检材作为研究对象。研究用检材主要可分为三类：第一类，吸管、瓶口、蛋糕等口腔接触类检材；第二，帽子、衣裤、眼睛等皮肤长期接触类检材；第三，手印、手套印、脚印等皮肤短期接触类检材。
1.2 仪器与试剂
本文研究采用脱落细胞收集仪、epMotion5075工作站、DNAIQTM试剂盒、硅珠法试剂、Microcon100浓缩柱、Identifiler Plus試剂盒、PCR扩增仪、3031XL型基因分析仪。
1.3 方法
第一，检材的处理。采用脱落细胞收集仪收取衣裤、帽子、口罩、塑料袋等大件物品上的脱落细胞，并将脱落的细胞集中到滤膜中，剪取第2层和第3层滤膜放置到1.5mL的离心管中。采用两布擦拭法将其余检材转移到1.5mL的离心管中；第二，DNA的提取。如表1所示，运用epMotion5075工作站结合DNAIQTM试剂盒将331份检材进行洗脱，洗脱至体积为50μL。运用硅珠法提取449份检材，洗脱至体积为30μL-50μL；第三，STR扩增和分型。采用IdentifilerPlus试剂盒、扩增体系10μL、DNA模板量2μL-4μL不等，在PCR扩增仪上进行扩增试验，并使用3031XL型基因分析仪进行DNA分析。
1.4 评定指标
第一，DNA模板扩增和电泳分型后，获得13个以上的STR基因座、Amelogenin基因座分型、峰值达到了100rfu以上，即为检出。检出率=“检出”的检材/检材的总数×100%。
2 结果
2.1 提取方法和检出率比较
如表2所示，三类检材中，皮肤长期接触类检材的检出率最高；5075结合磁珠法的检出率为13.90%，手工硅珠法的检出率为28.95%，手工硅珠法优于5075结合磁珠法。
2.2 检验时限和检出率
由于本文所统计的口腔接触类脱落细胞检材和皮肤长期接触类检材的数量较少，所以，仅以皮肤短暂接触类脱落细胞检材按检验时限分类。如表3所示，随着检验时限的延长，两种方法的检出率都在逐渐下降，且每个时限内的手工硅珠法的检出率均优于5075结合磁珠法（案发3周以上和案发3天内的检材优于数量较低，所以，检出率未呈现出规律性变化）。
3 讨论
在案多人少情况下，工作人员可以利用自动化工作站高通量提取各种生物检材的DNA。将磁珠法与自动化工作站结合可以有效提高血痕、唾液、组织等常量DNA检材的检出率，但对皮肤短暂接触类脱落细胞的检出效率却不是很理想。同时，利用自动化工作站操作流程较机械，还会在提取过程中出现载体堵塞枪头、裂解液转移不充分等情况，严重影响着检出率。手工硅珠法与5075结合磁珠法的提取原理相同，都是在高盐的环境下通过裂解液中硫氰酸胍使蛋白变形，使蛋白与DNA分离，再让DNA结合到二氧化硅上，通过漂洗提取DNA。文章研究结果显示，5075结合磁珠法的检出率为13.90%，手工硅珠法的检出率为28.95%，手工硅珠法优于5075结合磁珠法；随着检验时限的延长，两种方法的检出率都在逐渐下降，且每个时限内的手工硅珠法的检出率均优于5075结合磁珠法。另外，工硅珠法还可以灵活调整洗脱体积，并针对不同的检材分别调整裂解液、硅珠悬液的量以及吸附时间，具有一定推广价值。
结束语
综上所述，手工硅珠法与5075结合磁珠法相比，手工硅珠法的检出率高于5075结合磁珠法。同时，随着检材的时限延长，DNA的检出率在逐渐下降，所以，相关工作人员在进行检材研究时，一定要注意尽早送检、及时检验，以保证检材的检出质量。
参考文献
[1] 马秀梓，孙润广.果核微量生物物证DNA检材提取方法的考量[J].中国法医学杂志，2016，31（06）：638-639.
[2] 张春梅，魏雪萍，王云凤.微量口腔脱落细胞检材的DNA检验方法探讨[J].全科口腔医学电子杂志，2016，3（09）：15+17.
[关键词]微量；脱落细胞；DNA检验方法
中图分类号：S652 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2018）08-0251-01
随着微量脱落细胞DNA检验方法的不断应用和发展，其检验结果在案件的侦破、起诉及审判中发挥的作用越来越明显。文章主要对微量脱落细胞DNA检验方法进行了比较研究，希望能为相关人士提供一定参考。
1 材料与方法
1.1 检材
如表1所示，本文研究选用实验室收集的780份脱落的细胞类检材作为研究对象。研究用检材主要可分为三类：第一类，吸管、瓶口、蛋糕等口腔接触类检材；第二，帽子、衣裤、眼睛等皮肤长期接触类检材；第三，手印、手套印、脚印等皮肤短期接触类检材。
1.2 仪器与试剂
本文研究采用脱落细胞收集仪、epMotion5075工作站、DNAIQTM试剂盒、硅珠法试剂、Microcon100浓缩柱、Identifiler Plus試剂盒、PCR扩增仪、3031XL型基因分析仪。
1.3 方法
第一，检材的处理。采用脱落细胞收集仪收取衣裤、帽子、口罩、塑料袋等大件物品上的脱落细胞，并将脱落的细胞集中到滤膜中，剪取第2层和第3层滤膜放置到1.5mL的离心管中。采用两布擦拭法将其余检材转移到1.5mL的离心管中；第二，DNA的提取。如表1所示，运用epMotion5075工作站结合DNAIQTM试剂盒将331份检材进行洗脱，洗脱至体积为50μL。运用硅珠法提取449份检材，洗脱至体积为30μL-50μL；第三，STR扩增和分型。采用IdentifilerPlus试剂盒、扩增体系10μL、DNA模板量2μL-4μL不等，在PCR扩增仪上进行扩增试验，并使用3031XL型基因分析仪进行DNA分析。
1.4 评定指标
第一，DNA模板扩增和电泳分型后，获得13个以上的STR基因座、Amelogenin基因座分型、峰值达到了100rfu以上，即为检出。检出率=“检出”的检材/检材的总数×100%。
2 结果
2.1 提取方法和检出率比较
如表2所示，三类检材中，皮肤长期接触类检材的检出率最高；5075结合磁珠法的检出率为13.90%，手工硅珠法的检出率为28.95%，手工硅珠法优于5075结合磁珠法。
2.2 检验时限和检出率
由于本文所统计的口腔接触类脱落细胞检材和皮肤长期接触类检材的数量较少，所以，仅以皮肤短暂接触类脱落细胞检材按检验时限分类。如表3所示，随着检验时限的延长，两种方法的检出率都在逐渐下降，且每个时限内的手工硅珠法的检出率均优于5075结合磁珠法（案发3周以上和案发3天内的检材优于数量较低，所以，检出率未呈现出规律性变化）。
3 讨论
在案多人少情况下，工作人员可以利用自动化工作站高通量提取各种生物检材的DNA。将磁珠法与自动化工作站结合可以有效提高血痕、唾液、组织等常量DNA检材的检出率，但对皮肤短暂接触类脱落细胞的检出效率却不是很理想。同时，利用自动化工作站操作流程较机械，还会在提取过程中出现载体堵塞枪头、裂解液转移不充分等情况，严重影响着检出率。手工硅珠法与5075结合磁珠法的提取原理相同，都是在高盐的环境下通过裂解液中硫氰酸胍使蛋白变形，使蛋白与DNA分离，再让DNA结合到二氧化硅上，通过漂洗提取DNA。文章研究结果显示，5075结合磁珠法的检出率为13.90%，手工硅珠法的检出率为28.95%，手工硅珠法优于5075结合磁珠法；随着检验时限的延长，两种方法的检出率都在逐渐下降，且每个时限内的手工硅珠法的检出率均优于5075结合磁珠法。另外，工硅珠法还可以灵活调整洗脱体积，并针对不同的检材分别调整裂解液、硅珠悬液的量以及吸附时间，具有一定推广价值。
结束语
综上所述，手工硅珠法与5075结合磁珠法相比，手工硅珠法的检出率高于5075结合磁珠法。同时，随着检材的时限延长，DNA的检出率在逐渐下降，所以，相关工作人员在进行检材研究时，一定要注意尽早送检、及时检验，以保证检材的检出质量。
参考文献
[1] 马秀梓，孙润广.果核微量生物物证DNA检材提取方法的考量[J].中国法医学杂志，2016，31（06）：638-639.
[2] 张春梅，魏雪萍，王云凤.微量口腔脱落细胞检材的DNA检验方法探讨[J].全科口腔医学电子杂志，2016，3（09）：15+17.