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目的探讨昆明小鼠胚胎成纤维细胞培养及应用。方法取昆明小鼠胚胎分离成纤维细胞，用丝裂霉素C处理成纤维细胞为胚胎干细胞制备饲养层，消化贴壁成纤维细胞为核移植提供供体细胞。结果13．5d、14．5d、15．5d孕鼠均可分离出成纤维细胞，14．5d孕鼠制作的成纤维细胞形态规则，3-5代成纤维细胞经处理可作饲养层，可作核移植供体细胞。结论昆明小鼠可分离成纤维细胞，用于饲养层制作及核移植供体细胞。