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【摘要】 目的 通过实验确定薄层色谱法由于实验条件不同,将会对鉴别结果产生很大影响,因此在薄层色谱鉴别过程中应充分考虑温度、湿度、不同厂家的薄层板、展开剂预平衡时间、使用次数、点样浓度等许多不确定因素的影响,确保实验结果的准确性。
【关键词】 薄层色谱;实验条件;温度;湿度;展开剂;浓度
文章编号:1004-7484(2013)-02-0892-01
通窍鼻炎片是由苍耳、黄芪、防风、白芷、白术(炒)、辛夷、薄荷等七味中药组方而成的糖衣片或薄膜衣片,具有散风消炎之功效,可用于鼻渊、鼻塞、流涕、鼻炎、鼻窦炎及过敏性鼻炎的治疗,具有较好的临床价值,是目前鼻炎治疗的首选中药之一,已被列为重点中药保护品种。在生产过程中,为有效控制药品质量,充分发挥疗效,我们对其主要成分黄芪在增加含量测定的同时,又补充了薄层色谱鉴别方法以保证检测结果的准确度。
薄层色谱法是中药成方制剂质量标准主要的研究和控制手段,由于具有专属性强,设备简单,操作简便,分离快速等优点而被广泛应用于药品检验,2010版药典仅新增此方法检验就高达2494项,可见薄层色谱法在药品检验应用之广。然而在通窍鼻炎片实际检验过程中我们发现,为得到较好分离,必须注意以下几个方面的問题。
1 样品处理
检品除衣后研细,加石油醚(60-90℃)超声处理30分钟,滤过,药渣挥干,由于实验所使用的石油醚沸点为60-90℃,因此采用自然挥干后药渣中含有的非极性成份较多,严重干扰了黄芪的鉴别反应,导致鉴别结果不清晰,所以经多次实验我们发现,采用水浴蒸干后再加正丁醇加热回流方法,由于正丁醇为有机溶剂,沸点高达117℃,为使有效成份提取充分完全,应使用电热套保证提取充分,不采用水浴加热回流,以免降低黄芪甲苷的浓度[1]。
2 展开剂
展开剂对薄层色谱的主要影响表现为如果多次使用将导致比例发生变化而使层析斑点明显减少,本次实验在展开剂使用过程中,由于展开系统以三氯甲烷-甲醇-水(63∶35∶10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂,因此需将展开系统10℃以下放置最好达8-10小时以上,拿出后于室温放置30分钟后再倾入层析缸中使溶剂蒸气达到预平衡约30分钟后使用,否则分离斑点不清晰,斑点展开是一条直线或斑点推不上去等异常状况,无法判断检验结果的可靠性[2]。
3 点样量
点样量浓度对实验影响较大,浓度太高导致展开剂从原点外围绕行而不是通过整个原点把样品带动向前展开,进而使斑点拖尾或重叠,降低分辨效率;点样量太低,又使斑点显现不清晰而影响判定结果,所以要有效地控制5-10μl点样量为佳[2-3]。
通过对通窍鼻炎片黄芪鉴别项的检验探讨,促使我们对薄层色谱的实验条件要特别加以注意和改进,尽可能使实验条件能最大程度满足有效成份的分离与检验,这正是《中国药典》2010年版一部附录薄层色谱的系统适用性试验的目的。因此在中药材,特别是中成药的薄层色谱鉴别有效成份中,由于中药材的特殊性,采集季节、提取时间、浓缩干燥条件等无法确定因素较多,生产工艺各厂不尽相同,所以中成药的起草标准就带有一定程度的不确定性,有的重现性较差,为检验结果的判定带来一定的困难。所以在《中国药典》2010年版一部附录薄层色谱法项下增加了系统适用性试验,要求实验人员尽可能采取不同方法将其有效成份完全分离,以保证检验结果的正确可靠。
综上所述,在中药的检验过程中,我们不能完全依赖标准,必要情况下应增加补充标准以确保实验结论判定以免出现判定失误,为药品生产企业带来不可预测的损失。
参考文献
[1] 中国药典[S].一部,2010:1057.
[2] 苏建俊,丁野,雷玉萍.银翘解毒浓缩丸的质量标准研究.中国药师,2005,8(6):475-476.
[3] 中国药典[S].一部,2010:283.
【关键词】 薄层色谱;实验条件;温度;湿度;展开剂;浓度
文章编号:1004-7484(2013)-02-0892-01
通窍鼻炎片是由苍耳、黄芪、防风、白芷、白术(炒)、辛夷、薄荷等七味中药组方而成的糖衣片或薄膜衣片,具有散风消炎之功效,可用于鼻渊、鼻塞、流涕、鼻炎、鼻窦炎及过敏性鼻炎的治疗,具有较好的临床价值,是目前鼻炎治疗的首选中药之一,已被列为重点中药保护品种。在生产过程中,为有效控制药品质量,充分发挥疗效,我们对其主要成分黄芪在增加含量测定的同时,又补充了薄层色谱鉴别方法以保证检测结果的准确度。
薄层色谱法是中药成方制剂质量标准主要的研究和控制手段,由于具有专属性强,设备简单,操作简便,分离快速等优点而被广泛应用于药品检验,2010版药典仅新增此方法检验就高达2494项,可见薄层色谱法在药品检验应用之广。然而在通窍鼻炎片实际检验过程中我们发现,为得到较好分离,必须注意以下几个方面的問题。
1 样品处理
检品除衣后研细,加石油醚(60-90℃)超声处理30分钟,滤过,药渣挥干,由于实验所使用的石油醚沸点为60-90℃,因此采用自然挥干后药渣中含有的非极性成份较多,严重干扰了黄芪的鉴别反应,导致鉴别结果不清晰,所以经多次实验我们发现,采用水浴蒸干后再加正丁醇加热回流方法,由于正丁醇为有机溶剂,沸点高达117℃,为使有效成份提取充分完全,应使用电热套保证提取充分,不采用水浴加热回流,以免降低黄芪甲苷的浓度[1]。
2 展开剂
展开剂对薄层色谱的主要影响表现为如果多次使用将导致比例发生变化而使层析斑点明显减少,本次实验在展开剂使用过程中,由于展开系统以三氯甲烷-甲醇-水(63∶35∶10)10℃以下放置的下层溶液为展开剂,因此需将展开系统10℃以下放置最好达8-10小时以上,拿出后于室温放置30分钟后再倾入层析缸中使溶剂蒸气达到预平衡约30分钟后使用,否则分离斑点不清晰,斑点展开是一条直线或斑点推不上去等异常状况,无法判断检验结果的可靠性[2]。
3 点样量
点样量浓度对实验影响较大,浓度太高导致展开剂从原点外围绕行而不是通过整个原点把样品带动向前展开,进而使斑点拖尾或重叠,降低分辨效率;点样量太低,又使斑点显现不清晰而影响判定结果,所以要有效地控制5-10μl点样量为佳[2-3]。
通过对通窍鼻炎片黄芪鉴别项的检验探讨,促使我们对薄层色谱的实验条件要特别加以注意和改进,尽可能使实验条件能最大程度满足有效成份的分离与检验,这正是《中国药典》2010年版一部附录薄层色谱的系统适用性试验的目的。因此在中药材,特别是中成药的薄层色谱鉴别有效成份中,由于中药材的特殊性,采集季节、提取时间、浓缩干燥条件等无法确定因素较多,生产工艺各厂不尽相同,所以中成药的起草标准就带有一定程度的不确定性,有的重现性较差,为检验结果的判定带来一定的困难。所以在《中国药典》2010年版一部附录薄层色谱法项下增加了系统适用性试验,要求实验人员尽可能采取不同方法将其有效成份完全分离,以保证检验结果的正确可靠。
综上所述,在中药的检验过程中,我们不能完全依赖标准,必要情况下应增加补充标准以确保实验结论判定以免出现判定失误,为药品生产企业带来不可预测的损失。
参考文献
[1] 中国药典[S].一部,2010:1057.
[2] 苏建俊,丁野,雷玉萍.银翘解毒浓缩丸的质量标准研究.中国药师,2005,8(6):475-476.
[3] 中国药典[S].一部,2010:283.