非纯培养物细菌蛋白酶DNA片段的克隆与表达

来源 :应用与环境生物学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：jiaonimaqubao110

【摘要】

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为了构建更多的蛋白酶基因工程菌，以及进行蛋白酶基因的直接进化研究，从非纯培养细菌总DNA中扩增各种编码蛋白酶的DNA片段．根据MEROPS和GenBank数据库中的枯草杆菌类蛋白酶的编

【作者】

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葛琴雅唐成康唐建华范兆心张义正

【机构】

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四川大学生命科学学院

【出处】

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应用与环境生物学报

【发表日期】

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2006年4期

【关键词】

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非纯培养物蛋白酶基因克隆降落PCR 碱性蛋白酶E 基因表达 impure culture peptidases gene cloning TD-PC

【基金项目】

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Supported by the National High-tech Research and Development Programof China （Grant No. 2001AA214181 ）

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为了构建更多的蛋白酶基因工程菌，以及进行蛋白酶基因的直接进化研究，从非纯培养细菌总DNA中扩增各种编码蛋白酶的DNA片段．根据MEROPS和GenBank数据库中的枯草杆菌类蛋白酶的编码区和成熟肽编码序列设计并合成了10条引物．富集培养胞外蛋白酶产生菌并提取了12个总DNA样品，分别用每对引物在降落PCR（Touchdown PCR，TD-PCR）条件下进行蛋白酶编码序列的扩增．选择了19个长800～1200bp的扩增片段测序，其结果为：8个是蛋白酶DNA片段，它们应属于4种不同的蛋白酶基因序列；同一对引

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