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以AlsCBF基因cDNA和植物表达载体pCAMBIA1301进行双酶切,将抗寒基因AlsCBF与表达载体正向选择系统结合,构建抗寒基因植物表达载体pCA1301-AlsCBF。对阳性克隆通过菌落PCR、酶切鉴定和测序分析,成功将目的基因序列正确连接到pCAMBIA1301,构建其植物表达载体,并转入根癌农杆菌LBA4404中。