钠钾泵Scr复合体通过调控自噬影响幼年哮喘大鼠气道重塑的机制研究

来源 :中华实用诊断与治疗杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:HOHO333
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目的 制备哮喘幼年大鼠模型,观察钠钾泵Scr复合体对哮喘幼年大鼠炎性因子及自噬的影响,探讨钠钾泵Scr复合体调控自噬改善幼年哮喘大鼠气道炎症、气道重塑的机制.方法 幼年SD大鼠100只随机分为空白对照组、模型组及钠钾泵Scr复合体低、中、高剂量组各20只.模型组及钠钾泵Scr复合体低、中、高剂量组制备哮喘模型.造模成功后,模型组不作任何干预;钠钾泵Scr复合体低、中、高剂量组分别尾静脉注射钠钾泵Scr复合体5,10,20 mL/(kg ? d),连续14d.空白对照组不制备模型,不作任何干预.药物处理后,5组大鼠行支气管肺泡灌洗检查,采集肺泡灌洗液检测白细胞总数及嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、中性粒细胞比率和白细胞介素(interleukin,IL)-4、IL-6水平;采集尾静脉血检测血清IL-4、IL-6水平;之后处死大鼠取肺组织,行HE染色,测定并计算支气管管壁面积/支气管内周长(WA/Pi)、支气管平滑肌面积/支气管内周长(S/Pi)、支气管平滑肌细胞核数目/支气管内周长(N/Pi),采用Western blot法检测肺组织α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、转化生长因子-β3(transforming growth factor-β,TGF-β)、微管相关蛋白轻链3(microtubule associated protein light chain 3,LC3)Ⅰ、LC3 Ⅱ蛋白相对表达量,采用实时荧光定量PCR法检测凋亡信号调节激酶1(apoptosis signal-regulating kinase 1,ASK1)、结节性硬化症因子1(tuberous sclerosis complex 1,TSC1)、caspase-8 mRNA相对表达量.结果 模型组及钠钾泵Scr复合体低、中、高剂量组支气管肺泡灌洗液白细胞总数、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞和中性粒细胞比率,血清及肺泡灌洗液中IL-4、IL-6水平和肺组织W/Pi、S/Pi和N/Pi均高于空白对照组(P<0.05),模型组高于钠钾泵Scr复合体低、中、高剂量组(P<0.05),钠钾泵Scr复合体低、中、高剂量组依次降低(P<0.05).模型组及钠钾泵Scr复合体低、中剂、高剂量组肺组织α-SMA(0.796±0.121、0.676±0.271、0.368±0.132、0.210±0.091)、TGF-β(0.723±0.213、0.598±0.213、0.476±0.271、0.381±0.108)、LC3 Ⅰ(0.621±0.381、0.562±0.211、0.518±0.132,0.459±0.208)、LC3 Ⅱ 蛋白(0.298±0.112、0.564±0.213、0.413±0.224、0.309±0.152)相对表达量均高于空白对照组(0.121 ±0.004、0.083±0.022,0.445±0.223、0.211 ±0.098),ASK1 mRNA(8.465±1.923、5.983±0.389、2.731±0.442、1.980±0.672)、TSC1 mRNA(13.498±0.223、4.719±0.831、6.073±0.521、8.229±0.983)、caspase-8 mRNA(10.755±0.036,9.056±0.024、6.283±0.035、4.401±0.042)相对表达量均高于空白对照组(0.963±0.221、9.605±0.452、2.308±0.024)(P<0.05),模型组肺组织α-SMA、TGF-3、LC3 Ⅰ 蛋白及ASK1 mRNA、TSC1 mRNA、caspase-8 mRNA相对表达量高于钠钾泵Scr复合体低、中、高剂量组(P<0.05),LC3Ⅱ蛋白相对表达量低于钠钾泵Scr复合体低、中、高剂量组(P<0.05);钠钾泵Scr复合体低、中、高剂量组肺组织α-SMA、TGF-β、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ蛋白及ASK1 mRNA、caspase-8 mRNA 相对表达量依次降低(P<0.05),TSC1 mRNA 相对表达量依次增高(P<0.05).结论 钠钾泵Scr复合体通过调控自噬水平改善大鼠的气道炎症及气道重塑,且呈剂量依赖性.
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