目的 分析人类转录因子X-盒结合蛋白1(X-box binding protein Ⅰ,XBP1)基因启动子在不同细胞系中转录活性的差别,研究其转录调控机制. 方法在对XBP1基因进行生物信息学分析的基础上,设计6种XBP1启动子缺失突变体,分别包括XBP1基因5′上游-1039～66 bp、-859～66 bp、-623～66 bp、-351～66 bp,-227～66 bp、-227～-45 bp,针对每一种缺失突变体构建相应的氯霉素乙酰转移酶(chloramphenicol acetyltansferase, CAT)报告基因载体,再分别瞬时转染K562、HepG2、NIH-3T3和L02细胞,应用报告基因CAT瞬时表达系统,检测XBP1每一种缺失突变体在K562、HepG2、NIH-3T3和L02 4种不同细胞中的活性差异,并进一步确定XBP1基因启动子的具体调节部位. 结果成功获得XBP1基因启动子6种缺失突变体的正确克隆和6种相应的报告基因载体p1-XBP1p,p2-XBP1p, p3-XBP1p, p4-XBP1p, p5-XBP1p, p6-XBP1p,每一种报告基因转染K562、HepG2、NIH-3T3和L02 4种不同细胞系后,p4-XBP1p和p5-XBP1p在K562、HepG2细胞中的转录活性均高于其它报告载澹琾5-XBP1p在HepG2细胞中转录活性最高;而6种报告基因载体在NIH-3T3小鼠成纤维细胞中不具有转录活性. 结论 XBP1基因的转录激活能力在不同细胞中有所差异,其表达活性具有一定的细胞类型特异性,与细胞类型和细胞状态密切相关;XBP1基因启动子的-227～66 bp区域是该启动子的核心部位,而且核心启动子区包括ATG翻译起始密码子的下游部位,这一部位是转录活性的重要部位,一旦缺失,XBP1基因启动子会丧失活性。
人类XBP1基因5′上游DNA序列的转录激活功能分析
【摘 要】
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目的 分析人类转录因子X-盒结合蛋白1(X-box binding protein Ⅰ,XBP1)基因启动子在不同细胞系中转录活性的差别,研究其转录调控机制. 方法在对XBP1基因进行生物信息学分析的基础上,设计6种XBP1启动子缺失突变体,分别包括XBP1基因5′上游-1039～66 bp、-859～66 bp、-623～66 bp、-351～66 bp,-227～66 bp、-227～-45
【机 构】
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400016,重庆医科大学细胞生物学与遗传学教研室,400016,重庆医科大学分子生物学教研室,400016,重庆医科大学分子生物学教研室,400016,重庆医科大学细胞生物学与遗传学教研室,4000
【出 处】
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中华医学遗传学杂志
【发表日期】
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2006年23期
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