【摘 要】
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目的 探讨微小核糖核酸-134(miR-134)在癫痫持续状态发生中的作用.方法 ①构建大鼠miR-134抑制慢病毒载体;②建立大鼠氯化锂-匹罗卡品癫痫持续状态模型,观察miR-134抑制对大
【机 构】
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空军军医大学西京医院神经内科,陕西西安,710032;解放军457医院神经内科,湖北武汉,430012;
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目的 探讨微小核糖核酸-134(miR-134)在癫痫持续状态发生中的作用.方法 ①构建大鼠miR-134抑制慢病毒载体;②建立大鼠氯化锂-匹罗卡品癫痫持续状态模型,观察miR-134抑制对大鼠发作潜伏期,癫痫持续状态时间,发作严重程度,脑电图功率以及海马神经元凋亡的影响.结果 ①将一段362 bp的包含2个miR-134竞争结合位点的脱氧核糖核酸(DNA)片段经XhoI和EcoRI酶切后插入质粒pCDH-CMV-MCS-EG(R) FP-MCS中EG(R) FP序列的下游,该片段转录产物与miR-134互补形成稳定的复合物,从而阻止了miR-134对靶信使核糖核酸(mRNA)的降解或翻译抑制,得到大鼠miR-134抑制慢病毒载体.②立体定向注射miR-134抑制慢病毒于大鼠海马并放置海马电极,2w后建立氯化锂-匹罗卡品大鼠癫痫持续状态模型,进行脑电图监测,结果提示miR-134抑制慢病毒组较相应对照病毒组V级发作潜伏期延长(P＜0.01),脑电图总功率降低(P＜0.001),癫痫持续状态时间缩短(P＜0.05).癫痫持续状态后3d制备脑片进行免疫荧光染色,结果提示miR-134抑制慢病毒组海马齿状回(DG)、CA1及CA3区较相应对照病毒组神经元核(NeuN)染色阳性细胞数增多,末端脱氧核苷酸转移酶介导的生物素脱氧尿嘧啶核苷酸缺口末端标记(TUNEL)阳性细胞减少.结论 抑制大鼠海马miR-134能够减轻癫痫持续状态发作并具有神经保护作用.
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