【摘 要】
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MAD7 is an engineered nuclease of the Class 2 type V-A CRISPR-Cas (Cas12a/Cpf1) family with a low level of homology to canonical Cas12a nucleases.It has been publicly released as a royalty-free nuclease for both academic and commercial use.Here,we demonst
【机 构】
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State Key Laboratory of Plant Cell and Chromosome Engineering,Center for Genome Editing,Institute of
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MAD7 is an engineered nuclease of the Class 2 type V-A CRISPR-Cas (Cas12a/Cpf1) family with a low level of homology to canonical Cas12a nucleases.It has been publicly released as a royalty-free nuclease for both academic and commercial use.Here,we demonstrate that the CRISPR-MAD7 system can be used for genome editing and recognizes T-rich PAM sequences (YTTN) in plants.Its editing efficiency in rice and wheat is comparable to that of the widely used CRISPR-LbCas12a system.We develop two variants,MAD7-RR and MAD7-RVR that increase the target range of MAD7,as well as an M-AFID (a MAD7-APOBEC fusion-induced deletion) system that creates predictable deletions from 5\'-deaminated Cs to the MAD7-cleavage site.Moreover,we show that MAD7 can be used for multiplex gene editing and that it is effec-tive in generating indels when combined with other CRISPR RNA orthologs.Using the CRISPR-MAD7 system,we have obtained regenerated mutant rice and wheat plants with up to 65.6％ efficiency.
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