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目的
应用二步聚合酶链反应(PCR)检测皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)的T细胞受体(TCR)基因重排,提高其准确性和特异性,并应用已知重排的cDNA序列,推测该病患者的特异肽链顺序,为免疫治疗提供新线索和途径.
方法先用TCR基因重排区域以外的部分为引物,做10～30个循环扩增.取得一定数量的cDNA,作为模板,再经30～40个循环扩增,获得较纯的cDNA.然后将此产物放入质粒,进一步分析DNA序列.按照分析结果,制备出特异的分子探针,对二步PCR扩增产物进行分子杂交,推测出患者的特异性肽链顺序.
结果以Vβ8为特殊引物所显示的反应带明显,用Vβ8顺序制成的分子探针杂交,示明显的特异性结合.特异性分子探针只与CTCL患者的cDNA杂交,与对照组标本不发生交叉反应.
结论二步PCR可准确地检测CTCL的TCR基因重排,其特异性强,并可在此基础上应用已知重排的cDNA序列推测该病患者的特异性肽链,为免疫治疗提供新线索和途径.