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目的
观察成纤维生长因子受体2(FGFR2)对小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化能力的影响。
方法过表达小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的FGFR2基因,噻唑蓝(MTT)法检测细胞24、48、72 h增殖能力。过表达FGFR2基因的小鼠骨髓间充质干细胞经成骨诱导分化14 d后,茜素红染色和碱性磷酸酶(ALP)染色法检测细胞成骨分化和矿化能力,Western blot检测成骨分化相关基因骨钙蛋白(OCN)、骨桥蛋白(OPN)、Runt相关基因2(Runx2)、ALP、骨形态发生蛋白-2(BMP-2)蛋白表达水平。建立去势骨质疏松症小鼠模型,动物水平研究上调FGFR2对小鼠骨质疏松症的影响,mircoCT评价细胞骨小梁数目和骨体积分数。
结果上调FGFR2促进BMSCs在24、48、72 h细胞增殖能力,FGFR2上调组小鼠BMSCs钙结节数量(95.7±8.9)高于对照组(26.4±3.9),差异有统计学意义。ALP染色结果显示FGFR2上调组成骨分化能力强于对照组,ALP活性定量分析结果显示,FGFR2上调组ALP活性[(6.33±1.33)U/L]强于对照组[(2.54±0.75) U/L],差异有统计学意义(P<0.05),FGFR2上调组小鼠BMSCs成骨分化基因OCN、OPN、Runx2、ALP、BMP-2蛋白表达水平高于对照组。FGFR2上调组小鼠胫骨骨小梁数目(Tb.N)[(2.37±0.26)/mm]高于对照组[(1.55±0.34)/mm],FGFR2上调组小鼠胫骨骨体积分数(BV/TV)[(9.97±1.77)%]高于对照组[(5.91±0.98)%]。
结论上调FGFR2可提高小鼠骨髓间充质干细胞增殖活性和成骨分化能力,可能有促进骨质疏松症恢复的作用。