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[摘要]目的：使用美国ABRAXIS麻痹性贝类毒素试剂盒对40个北海海域的文蛤样品进行PSP检测。方法：使用酶联免疫试剂盒对文蛤麻痹性贝类毒素进行检测，检测限为0.02ng/g，灵敏度为为0.015 ng/g。通过建立PSP纯溶液的标准曲线测定，待测水产品的PSP浓度。结果：建立标准曲线后，最终测得水产品样品PSP的平均含量为1.7ng/g结论：应用ELISA法检测麻痹性贝类毒素，具有简便、快捷、成本低廉等特点，适用于快速检测的样品。可以应用于水产品质量的快速检测以及对贝类进行质量监控。
麻痹性贝类毒素（PSP）指存在于贝类体内，摄食后可以产生麻痹作用的一种海洋生物毒性物质。PSP的化学结构主要是石房蛤毒索（Saxitoxin），是目前世界上一类分布最广、食物中毒频率最高、危害度最大的毒素。
关键词：水产品；麻痹性毒素；检测
中图分类号：S9 文献标识码：A 文章编号：1009-914x（2013）02-01-01
1 资料与方法
1.1 样品 随机选取40个北海海域的文蛤样品，用于后续PSP检测使用。
1.2 试剂 美国ABRAXIS贝类毒素试剂盒，甲醇。
1.3仪器 酶标比色仪（BIO一TEK）、均质器、微量进样器、离心机、电子天平。
1.4方法
1.4.1测定原理 用特异性抗体同石房蛤毒素进行结合。样本中的石房蛤毒素可与石房蛤毒素一酶的结合物进行竞争，与微孔板上的兔抗一石房蛤毒素抗体发生特异性结合。石房蛤毒素抗体和微孔底部的二抗发生结合，洗板后加入底物，此时会产生蓝色物质。颜色的深度同样本中的石房蛤毒素浓度成反比。在规定时间内终止颜色反应，用酶标仪进行读值。每个孔内的样本浓度通过做出标准曲线来读取。
1.3.2样品前处理 除去样品的贝壳，用蒸馏水洗净后放入均质器中。称取15g均质后的样品，加入15mL0.1 moL/L的盐酸溶液，并煮沸5min。煮沸过程中需要不断搅拌。冷却均质后，以3500r/min的速度进行10分钟离心。取出上清液，用6mol/L的盐酸溶液调节pH，使pH小于4。取10微升调节pH后的均质液，用蒸馏水稀释到1 mL，充分混匀待测。
1.4.2测定程序 依次在微孔板中加入浓度为0，0.02、0.005、0.10、0.20、0.40ng/mL的PSP标准溶液和待测提取液各50μL。每个微孔中加入50μL的石房蛤毒素酶标物，轻轻搅拌使混合均匀；在每个孔中加入50μL石房蛤毒素抗体，轻轻搅拌式混合，覆盖上薄膜，室温放置30min。充分反映后，将微孔中的溶液倒出，用洗液清洗3次，最后倒净残留的洗液。向每个测试孔里加入100μL的底物溶液。将微孔封闭，轻轻震荡使使微孔板里的液体充分混匀。室温放置30min，避免阳光直射。最后向每个测试孔内加入100μL的终止液。用酶标测定仪于450nm处测量各溶液的吸光度。绘制标准曲线，并进行计算。
1.5 数据分析 可以采用Excel2007绘制标准曲线。算出标准吸光度值的平均值，计算每个标准的D/D0。以标准的D/D0为y轴、各石房蛤毒素的标准浓度作x轴构建标准曲线。
2 结果
2.1灵敏度及检测限 灵敏度：0.01ng/g。检测下限：0.02ng/g。
2.2 标准液检测D/ D0（%）结果 见表2
表2 标准液D/ D0（%）结果
标准液浓度（ng/mL） D/ D0（%）
0.02 0.9662
0.05 0.9617
0.10 0.9534
0.20 0.9361
0.40 0.9019
2.3标准曲线绘制 使用Excel2007绘制标准曲线，见图1
图1 PSP标准曲线图
2.4 样品含量的计算 待测样品PSP的平均含量为1.7ng/g
3 讨论
麻痹性贝类毒是一种神经肌肉麻痹剂。作用与人体时，主要是通过阻断细胞的钠离子通道造成神经系统的传输障碍进而产生麻痹作用。[1]贝类摄入此毒素时对自身无害，但当人食用后，毒素会释放并给人体带来毒性作用。一般来说，潜伏期仅数分钟。发作后，主要症状包括：四肢肌肉麻痹、恶心头痛、皮疹等，更严重的会致人死亡。1983年菲律宾曾发生一例麻痹性贝类中毒事件，致21人死亡。
麻痹性贝类毒素所带来的危害有突发性和广泛性。由于PSP的毒性大，反应快，无合适的解毒剂，给治疗带来很大困难。所以需要开展对麻痹性贝类毒素含量的检验，以确保人民的生命安全[2]。
PSP是一种碱性水溶化合物 ，在碱性条件下不稳定，这也对研究人员的分析带来一定的困难[3]。这对分析仪器提出了精确可靠的要求。自上世纪60年代来，有研究人员开始研究PSP的免疫检测技术。80年代末期，发展了酶联免疫吸附的技术，但因交叉反应效率低下，不能充分检测而未得到广泛应用。随着科技的发展，出现了一系列较为先进的技术。本实验即采用ELISA检测方法水产品中麻痹性贝类毒素的含量。由于PSP本身为小分子物质，缺乏免疫原性，因此需要将其连接到大分子的载体上，使成为完全抗原后再用来免疫动物[4]。一般采用实验中在2小时内完成酶联免疫试剂盒对麻痹性贝类毒素的检测过程，检测限为0.02ng/g，灵敏度为为0.015 ng/g，最终待测样品PSP的平均含量为1.7ng/g。
本次应用ELISA法检测麻痹性贝类毒素，具有简便、快捷、成本低廉等特点，适用于快速检测的样品。可以应用于水产品质量的快速检测以及对贝类进行质量监控（当PSP含量特别高时，结果可能存在一定的差异）。因此，应用ELISA方法对于麻痹性贝类的中毒防治、水产业的发展、公众的健康都是非常重要的。
参考文献：
[1] 刘智勇，计融.麻痹性贝类毒素研究进展（综述） [J].中国热带医学.2006（2）：340-344.
[2] 吴小松，姜雪.麻痹性贝类毒素的检测方法[J].科技风，2009，（20）：194-195.
[3] 刘智勇，计融.麻痹性贝类毒素研究进展（综述） [J].中国热带医学.2006（2）：340-344.
[4]林晶.贝类毒素分析技术的研究进展[J].黎明职业大学学报，2010（4）：26-27.
作者：曹伟红，女，45岁，工程师，主要从事食品分析检验工作。
麻痹性贝类毒素（PSP）指存在于贝类体内，摄食后可以产生麻痹作用的一种海洋生物毒性物质。PSP的化学结构主要是石房蛤毒索（Saxitoxin），是目前世界上一类分布最广、食物中毒频率最高、危害度最大的毒素。
关键词：水产品；麻痹性毒素；检测
中图分类号：S9 文献标识码：A 文章编号：1009-914x（2013）02-01-01
1 资料与方法
1.1 样品 随机选取40个北海海域的文蛤样品，用于后续PSP检测使用。
1.2 试剂 美国ABRAXIS贝类毒素试剂盒，甲醇。
1.3仪器 酶标比色仪（BIO一TEK）、均质器、微量进样器、离心机、电子天平。
1.4方法
1.4.1测定原理 用特异性抗体同石房蛤毒素进行结合。样本中的石房蛤毒素可与石房蛤毒素一酶的结合物进行竞争，与微孔板上的兔抗一石房蛤毒素抗体发生特异性结合。石房蛤毒素抗体和微孔底部的二抗发生结合，洗板后加入底物，此时会产生蓝色物质。颜色的深度同样本中的石房蛤毒素浓度成反比。在规定时间内终止颜色反应，用酶标仪进行读值。每个孔内的样本浓度通过做出标准曲线来读取。
1.3.2样品前处理 除去样品的贝壳，用蒸馏水洗净后放入均质器中。称取15g均质后的样品，加入15mL0.1 moL/L的盐酸溶液，并煮沸5min。煮沸过程中需要不断搅拌。冷却均质后，以3500r/min的速度进行10分钟离心。取出上清液，用6mol/L的盐酸溶液调节pH，使pH小于4。取10微升调节pH后的均质液，用蒸馏水稀释到1 mL，充分混匀待测。
1.4.2测定程序 依次在微孔板中加入浓度为0，0.02、0.005、0.10、0.20、0.40ng/mL的PSP标准溶液和待测提取液各50μL。每个微孔中加入50μL的石房蛤毒素酶标物，轻轻搅拌使混合均匀；在每个孔中加入50μL石房蛤毒素抗体，轻轻搅拌式混合，覆盖上薄膜，室温放置30min。充分反映后，将微孔中的溶液倒出，用洗液清洗3次，最后倒净残留的洗液。向每个测试孔里加入100μL的底物溶液。将微孔封闭，轻轻震荡使使微孔板里的液体充分混匀。室温放置30min，避免阳光直射。最后向每个测试孔内加入100μL的终止液。用酶标测定仪于450nm处测量各溶液的吸光度。绘制标准曲线，并进行计算。
1.5 数据分析 可以采用Excel2007绘制标准曲线。算出标准吸光度值的平均值，计算每个标准的D/D0。以标准的D/D0为y轴、各石房蛤毒素的标准浓度作x轴构建标准曲线。
2 结果
2.1灵敏度及检测限 灵敏度：0.01ng/g。检测下限：0.02ng/g。
2.2 标准液检测D/ D0（%）结果 见表2
表2 标准液D/ D0（%）结果
标准液浓度（ng/mL） D/ D0（%）
0.02 0.9662
0.05 0.9617
0.10 0.9534
0.20 0.9361
0.40 0.9019
2.3标准曲线绘制 使用Excel2007绘制标准曲线，见图1
图1 PSP标准曲线图
2.4 样品含量的计算 待测样品PSP的平均含量为1.7ng/g
3 讨论
麻痹性贝类毒是一种神经肌肉麻痹剂。作用与人体时，主要是通过阻断细胞的钠离子通道造成神经系统的传输障碍进而产生麻痹作用。[1]贝类摄入此毒素时对自身无害，但当人食用后，毒素会释放并给人体带来毒性作用。一般来说，潜伏期仅数分钟。发作后，主要症状包括：四肢肌肉麻痹、恶心头痛、皮疹等，更严重的会致人死亡。1983年菲律宾曾发生一例麻痹性贝类中毒事件，致21人死亡。
麻痹性贝类毒素所带来的危害有突发性和广泛性。由于PSP的毒性大，反应快，无合适的解毒剂，给治疗带来很大困难。所以需要开展对麻痹性贝类毒素含量的检验，以确保人民的生命安全[2]。
PSP是一种碱性水溶化合物 ，在碱性条件下不稳定，这也对研究人员的分析带来一定的困难[3]。这对分析仪器提出了精确可靠的要求。自上世纪60年代来，有研究人员开始研究PSP的免疫检测技术。80年代末期，发展了酶联免疫吸附的技术，但因交叉反应效率低下，不能充分检测而未得到广泛应用。随着科技的发展，出现了一系列较为先进的技术。本实验即采用ELISA检测方法水产品中麻痹性贝类毒素的含量。由于PSP本身为小分子物质，缺乏免疫原性，因此需要将其连接到大分子的载体上，使成为完全抗原后再用来免疫动物[4]。一般采用实验中在2小时内完成酶联免疫试剂盒对麻痹性贝类毒素的检测过程，检测限为0.02ng/g，灵敏度为为0.015 ng/g，最终待测样品PSP的平均含量为1.7ng/g。
本次应用ELISA法检测麻痹性贝类毒素，具有简便、快捷、成本低廉等特点，适用于快速检测的样品。可以应用于水产品质量的快速检测以及对贝类进行质量监控（当PSP含量特别高时，结果可能存在一定的差异）。因此，应用ELISA方法对于麻痹性贝类的中毒防治、水产业的发展、公众的健康都是非常重要的。
参考文献：
[1] 刘智勇，计融.麻痹性贝类毒素研究进展（综述） [J].中国热带医学.2006（2）：340-344.
[2] 吴小松，姜雪.麻痹性贝类毒素的检测方法[J].科技风，2009，（20）：194-195.
[3] 刘智勇，计融.麻痹性贝类毒素研究进展（综述） [J].中国热带医学.2006（2）：340-344.
[4]林晶.贝类毒素分析技术的研究进展[J].黎明职业大学学报，2010（4）：26-27.
作者：曹伟红，女，45岁，工程师，主要从事食品分析检验工作。