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目的与意义:西瓜是一种非呼吸跃变果实,经过漫长的进化,由不能正常成熟的野生西瓜进化成现代栽培西瓜。但是,西瓜的进化机制及脱落酸在进化中的作用机制尚不明确。以栽培西瓜(‘97103’)、半野生西瓜(‘PI179878’)及野生西瓜(‘PI296341’)为研究材料,测定不同西瓜品种成熟过程中游离态及结合态ABA的含量,并利用课题组已经建立的西瓜不同发育时期的转录组数据,对西瓜果实成熟过程中ABA代谢相关基因及ABA信号途径相关基因进行分析,探索脱落酸在西瓜果实成熟过程中的作用。
材料与方法:利用质谱联用的方法测定不同西瓜品种成熟过程中游离态及结合态ABA的含量。首先,栽培西瓜(‘97103’)、半野生西瓜(‘PI179878’)在授粉后10、18、26、34 d收集样品,包括中心果肉、胎座、中果皮及种子;野生西瓜(‘PI296341’)在授粉10、18、26、34、42、50 d收集样品,包括中心果肉、胎座、中果皮及种子。其次,利用中国农业大学生物质谱平台提供的检测方法,对西瓜果实中的游离ABA及结合态ABA(ABA-GE)进行检测。为了进一步明确ABA在西瓜果实成熟过程中的作用,对授粉15 d后的‘97103’品种外源施加ABA或ABA合成抑制剂NDGA,观察是否影响西瓜果实的成熟,并利用手持糖度计ATC-1E检测中心果肉的可溶性固形物,利用FT-327硬度计检测中心果肉的硬度。通过课题组已经建立的西瓜不同发育时期的转录组数据,对西瓜果实成熟过程中ABA代谢相关基因及ABA信号途径相关基因进行分析;并利用100余份重测序信息对差异表达基因进行单倍型分析,进一步明确造成栽培品种及野生品种中ABA含量差异的原因。
结果与分析:(1) ABA含量与西瓜果实发育和成熟是高度相关的。随着果实发育成熟,栽培西瓜(‘97103’)、半野生西瓜(‘PI179878’)中心果肉、胎座及中果皮中的游离ABA含量和结合态ABA的含量逐渐升高,在授粉后34 d达到了峰值;野生西瓜(‘PI296341’)果实中的ABA含量显著低于栽培品种及半野生品种,且维持在较低的水平;栽培品种、半野生品种及野生品种种子中的ABA含量没用显著差异。通过对31种代表性材料的分析发现,ABA含量与可溶性固形物的含量是高度相关的。以上试验说明,ABA参与调控西瓜果实成熟及品质的形成。(2) ABA含量影响栽培西瓜果实成熟。外源施加ABA促进了西瓜果实成熟,提高了可溶性固形物含量,降低了果实硬度;外源施加ABA抑制剂NDGA抑制了西瓜果实成熟,降低了可溶性固形物含量,提高了果实硬度。(3) ABA代谢关键基因ClNCED及ClCYP707在西瓜果实成熟及发育过程中动态表达。ClNCEDs(Cla005404和Cla009779)在中心果肉中的表达趋势一致,随着果实成熟表达升高,在授粉后34 d达到了峰值。ClCYP707As(Cla0016011及Cla20673)的表达随着果实的成熟逐渐降低,以上结果表明,西瓜果实成熟过程中ABA代谢基因的表达可能影响ABA含量。(4)ABA代谢及ABA信號转导相关基因在栽培和野生西瓜中的表达模式不同。西瓜果实成熟过程中,Cla005404 (NCED)、Cla009779(NCED)、Cla020673(CYP707A)、Cla006655(UGT)和Cla020180 (SnRK2)动态表达,且在栽培品种和野生品种中存在差异。(5)ABA通路基因启动子区的遗传变异可能是与西瓜果实进化有关。CYP707As(Cla020673)的启动子区域上有3个SNP(-738,C/A;-1681,C/T;-1832,G/T) ,ClSnRK2.3(Cla020180)的启动子区域上有1个SNP(-701,G/A)。
结
材料与方法:利用质谱联用的方法测定不同西瓜品种成熟过程中游离态及结合态ABA的含量。首先,栽培西瓜(‘97103’)、半野生西瓜(‘PI179878’)在授粉后10、18、26、34 d收集样品,包括中心果肉、胎座、中果皮及种子;野生西瓜(‘PI296341’)在授粉10、18、26、34、42、50 d收集样品,包括中心果肉、胎座、中果皮及种子。其次,利用中国农业大学生物质谱平台提供的检测方法,对西瓜果实中的游离ABA及结合态ABA(ABA-GE)进行检测。为了进一步明确ABA在西瓜果实成熟过程中的作用,对授粉15 d后的‘97103’品种外源施加ABA或ABA合成抑制剂NDGA,观察是否影响西瓜果实的成熟,并利用手持糖度计ATC-1E检测中心果肉的可溶性固形物,利用FT-327硬度计检测中心果肉的硬度。通过课题组已经建立的西瓜不同发育时期的转录组数据,对西瓜果实成熟过程中ABA代谢相关基因及ABA信号途径相关基因进行分析;并利用100余份重测序信息对差异表达基因进行单倍型分析,进一步明确造成栽培品种及野生品种中ABA含量差异的原因。
结果与分析:(1) ABA含量与西瓜果实发育和成熟是高度相关的。随着果实发育成熟,栽培西瓜(‘97103’)、半野生西瓜(‘PI179878’)中心果肉、胎座及中果皮中的游离ABA含量和结合态ABA的含量逐渐升高,在授粉后34 d达到了峰值;野生西瓜(‘PI296341’)果实中的ABA含量显著低于栽培品种及半野生品种,且维持在较低的水平;栽培品种、半野生品种及野生品种种子中的ABA含量没用显著差异。通过对31种代表性材料的分析发现,ABA含量与可溶性固形物的含量是高度相关的。以上试验说明,ABA参与调控西瓜果实成熟及品质的形成。(2) ABA含量影响栽培西瓜果实成熟。外源施加ABA促进了西瓜果实成熟,提高了可溶性固形物含量,降低了果实硬度;外源施加ABA抑制剂NDGA抑制了西瓜果实成熟,降低了可溶性固形物含量,提高了果实硬度。(3) ABA代谢关键基因ClNCED及ClCYP707在西瓜果实成熟及发育过程中动态表达。ClNCEDs(Cla005404和Cla009779)在中心果肉中的表达趋势一致,随着果实成熟表达升高,在授粉后34 d达到了峰值。ClCYP707As(Cla0016011及Cla20673)的表达随着果实的成熟逐渐降低,以上结果表明,西瓜果实成熟过程中ABA代谢基因的表达可能影响ABA含量。(4)ABA代谢及ABA信號转导相关基因在栽培和野生西瓜中的表达模式不同。西瓜果实成熟过程中,Cla005404 (NCED)、Cla009779(NCED)、Cla020673(CYP707A)、Cla006655(UGT)和Cla020180 (SnRK2)动态表达,且在栽培品种和野生品种中存在差异。(5)ABA通路基因启动子区的遗传变异可能是与西瓜果实进化有关。CYP707As(Cla020673)的启动子区域上有3个SNP(-738,C/A;-1681,C/T;-1832,G/T) ,ClSnRK2.3(Cla020180)的启动子区域上有1个SNP(-701,G/A)。
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