研究重楼皂苷Ⅰ对人黑素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响及相关机制。
方法采用CCK8法测定0（对照组）、1.5、3.0、6.0 mg/L重楼皂苷Ⅰ对正常人黑素细胞和A375细胞增殖的影响；Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡形态；流式细胞仪检测A375细胞周期变化及细胞凋亡水平；荧光染料（DCFH-DA）测定A375细胞内活性氧的变化；罗丹明123染色测定线粒体膜电位变化；利用分光光度法检测重楼皂苷Ⅰ处理后的A375细胞内ATP和上清液中乳酸、葡萄糖含量；Western印迹法检测A375细胞内Bcl-2、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3、细胞周期蛋白D1、丙酮酸激酶同工酶2（PKM2）表达。多组均数比较采用单因素方差分析，组间多重比较采用SNK-q检验。
结果在工作浓度内重楼皂苷Ⅰ对正常人黑素细胞增殖无明显影响，但能明显抑制A375细胞的增殖（P < 0.01）；荧光显微镜下发现，重楼皂苷Ⅰ处理后的A375细胞出现明显的凋亡形态。0（对照组）、1.5、3.0、6.0 mg/L重楼皂苷Ⅰ分别处理A375细胞后，随重楼皂苷Ⅰ浓度增加，细胞凋亡率（分别为4.25% ± 1.27%、10.03% ± 1.49%、36.62% ± 1.97%、44.11% ± 2.47%）逐渐升高（F = 665.7，P < 0.01），G0/G1期细胞比例（分别为54.13% ± 2.57%、67.35% ± 3.79%、74.39% ± 3.29%、82.29% ± 3.99%）亦渐增多（F = 71.81，P < 0.01）；细胞内活性氧呈明显上升趋势，细胞线粒体膜电位呈明显下降趋势（P < 0.01）；细胞内ATP含量下降（P < 0.01），培养液中乳酸含量下降，葡萄糖含量上升（P < 0.01）；细胞Bax、cleaved-caspase-3蛋白表达增多，但Cyclin D1、Bcl-2和PKM2蛋白表达下降（P < 0.01）。
结论重楼皂苷Ⅰ可能通过激活细胞内活性氧的产生，引起线粒体膜电位下降，诱导A375细胞凋亡，并通过抑制PKM2、细胞周期蛋白D1表达，使细胞阻滞于G0/G1期。