研究重楼皂苷Ⅰ对人黑素瘤A375细胞增殖和凋亡的影响及相关机制。
方法采用CCK8法测定0(对照组)、1.5、3.0、6.0 mg/L重楼皂苷Ⅰ对正常人黑素细胞和A375细胞增殖的影响;Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡形态;流式细胞仪检测A375细胞周期变化及细胞凋亡水平;荧光染料(DCFH-DA)测定A375细胞内活性氧的变化;罗丹明123染色测定线粒体膜电位变化;利用分光光度法检测重楼皂苷Ⅰ处理后的A375细胞内ATP和上清液中乳酸、葡萄糖含量;Western印迹法检测A375细胞内Bcl-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3、细胞周期蛋白D1、丙酮酸激酶同工酶2(PKM2)表达。多组均数比较采用单因素方差分析,组间多重比较采用SNK-q检验。
结果在工作浓度内重楼皂苷Ⅰ对正常人黑素细胞增殖无明显影响,但能明显抑制A375细胞的增殖(P < 0.01);荧光显微镜下发现,重楼皂苷Ⅰ处理后的A375细胞出现明显的凋亡形态。0(对照组)、1.5、3.0、6.0 mg/L重楼皂苷Ⅰ分别处理A375细胞后,随重楼皂苷Ⅰ浓度增加,细胞凋亡率(分别为4.25% ± 1.27%、10.03% ± 1.49%、36.62% ± 1.97%、44.11% ± 2.47%)逐渐升高(F = 665.7,P < 0.01),G0/G1期细胞比例(分别为54.13% ± 2.57%、67.35% ± 3.79%、74.39% ± 3.29%、82.29% ± 3.99%)亦渐增多(F = 71.81,P < 0.01);细胞内活性氧呈明显上升趋势,细胞线粒体膜电位呈明显下降趋势(P < 0.01);细胞内ATP含量下降(P < 0.01),培养液中乳酸含量下降,葡萄糖含量上升(P < 0.01);细胞Bax、cleaved-caspase-3蛋白表达增多,但Cyclin D1、Bcl-2和PKM2蛋白表达下降(P < 0.01)。
结论重楼皂苷Ⅰ可能通过激活细胞内活性氧的产生,引起线粒体膜电位下降,诱导A375细胞凋亡,并通过抑制PKM2、细胞周期蛋白D1表达,使细胞阻滞于G0/G1期。