目的 探讨CpG甲基转移酶M.SssI对人结肠癌HT-29细胞中紧密连接蛋白7(claudin-7)和claudin-8表达的调节作用,及其对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响.方法 以50 U/ml的M.SssI处理HT-29细胞24h(过甲基化组),采用重亚硫酸盐测序法检测claudin-7和claudin-8基因启动子区域CpG岛的甲基化状态,实时荧光定量PCR法检测claudin-7和claudin-8 mRNA的表达,细胞免疫荧光技术和Western blot法检测claudin-7和claudin-8蛋白的表达,Hoechst 33342荧光染色法和流式细胞术检测HT-29细胞的凋亡,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测HT-29细胞的增殖.同时设对照组(以2μlPBS处理HT-29细胞)和5-Azacytidine组(以10μmol/L 5-Azacytidine处理HT-29细胞).结果 过甲基化组claudin-7和claudin-8靶序列中发生甲基化的CpG胞嘧啶数目分别为25和10个,对照组分别为9和5个,5-Azacytidine组分别为0和3个.过甲基化组claudin-7和claudin-8mRNA和蛋白的表达均明显低于对照组(均P＜0.05),而5-Azacytidine组claudin-7和claudin-8mRNA和蛋白的表达均明显高于对照组(均P＜0.05).Hoechst 33342荧光染色结果显示,对照组和5-Azacytidine组的HT-29细胞均呈均匀蓝色荧光,细胞呈圆形,大小一致,无明显差异；而过甲基化组HT-29细胞呈高度白色荧光的凋亡细胞明显增多.流式细胞术检测结果显示,过甲基化组HT-29细胞的早期凋亡率比对照组增加84.7％ (P =0.002).MTT法检测结果显示,过甲基化组HT-29细胞的生长速度较对照组缓慢(P =0.002),HT-29细胞的增殖抑制率为32.1％；5-Azacytidine组HT-29细胞的增殖水平与对照组相似(P =0.084).结论 CpG甲基转移酶可以通过上调claudin-7和claudin-8基因启动子区的甲基化程度,下调HT-29细胞中claudin-7和claudin-8 mRNA和蛋白的表达,从而诱导细胞产生凋亡,并抑制其增殖.
CpG甲基转移酶诱导紧密连接蛋白7和8基因表达下调对人结肠癌HT-29细胞增殖和凋亡的影响
【摘 要】
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目的 探讨CpG甲基转移酶M.SssI对人结肠癌HT-29细胞中紧密连接蛋白7(claudin-7)和claudin-8表达的调节作用,及其对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响.方法 以50 U/ml的M.SssI处理HT-29细胞24h(过甲基化组),采用重亚硫酸盐测序法检测claudin-7和claudin-8基因启动子区域CpG岛的甲基化状态,实时荧光定量PCR法检测claudin-7和claudin
【机 构】
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(210002南京大学医学院临床学院南京军区南京总医院消化内科),(210002南京大学医学院临床学院南京军区南京总医院消化内科),(210002南京大学医学院临床学院南京军区南京总医院消化内科),(
【出 处】
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中华肿瘤杂志
【发表日期】
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2013年35期
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