【摘 要】
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为了研究NS5A与Rab25的亚细胞定位及作用基因区段,先构建pDsRed1-N1-Rab25红光载体,利用经过改造并加GFP的pcDNA3.1(+)-NS2、pcDNA3.1(+)-NS3和pcDNA3.1(+)-NS5A载体,将pDsRe
【基金项目】
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家畜疫病病原生物学国家重点实验室2018年开放基金课题资助项目(SKLVEB2018-KFKT001)
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为了研究NS5A与Rab25的亚细胞定位及作用基因区段,先构建pDsRed1-N1-Rab25红光载体,利用经过改造并加GFP的pcDNA3.1(+)-NS2、pcDNA3.1(+)-NS3和pcDNA3.1(+)-NS5A载体,将pDsRedN1-Rab25红光载体与这3种绿光载体分别共转染于猪血管内皮细胞(SUVEC),通过共聚焦显微镜观察显示Rab25和NS2、NS3共定位现象不明显而与NS5A存在着明显共定位。为了进一步研究NS5A与Rab25作用基因区段,构建NS5A的3个分段基因载体:pEGFP-C1-NS5A-1-84、pEGFP-C1-NS5A-84-804和pEGFP-C1-NS5A-804-1 491,转染SUVEC并观察共定位情况,结果显示Rab25与NS5A的804～1 491 bp存在明显共定位,而与1～84,84～804 bp的共定位现象不明显。结果说明Rab25与NS5A基因的804～1 491 bp存在共定位,这为继续研究Rab25与NS5A的关键作用位点及互作奠定基础。
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