目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1 (MKP-1)在缺氧胃癌细胞系SGC7901中的表达及对缺氧诱导因子-1(HIF-1)的影响. 方法采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR) 和Western 印迹检测MKP-1在常氧及缺氧状态下胃癌细胞系SGC7901中的表达;借助DNA重组技术构建MKP-1基因的正义真核表达载体;利用脂质体将正义真核表达载体和空载体转入SGC7901细胞;双荧光素酶报告基因 (Dual Luciferase Reporter, DLR) 检测系统检测荧光素酶活性并采用ELISA法检测SGC7901细胞培养上清血管内皮生长因子(VEGF)的变化. 结果 (1) 半定量 RT-PCR 和Western 印迹结果提示,MKP-1在胃癌细胞系SGC7901中表达,缺氧时其表达上调; (2) 分别将MKP-1正义真核表达载体和pcDNA3.1空载体瞬时转入SGC7901细胞; 转染48 h后,缺氧12 h磷酸化HIF-1α在正义真核表达载体转染细胞(SGC7901-MKP-1)中的表达低于空载体转染细胞(SGC7901-空载体)和未转染细胞(SGC7901).(3) 报告基因试验显示常氧情况下3、6和12 h 荧光素酶活性在SGC7901细胞、SGC7901-空载体细胞和 SGC7901-MKP-1细胞中差异无显著意义(P>0.05);缺氧情况下,SGC7901-MKP-1细胞中荧光素酶活性在3、6和12 h 均明显低于SGC7901细胞和SGC7901-空载体(P<0.01).(4) SGC7901细胞在缺氧3、6、12、24 h VEGF的分泌量高于常氧情况下同一时间点VEGF的分泌量(P<0.05或P<0.01);而在缺氧同一时间点SGC7901-MKP-1细胞VEGF的分泌量低于SGC7901及SGC7901-空载体细胞(P<0.01). 结论胃癌细胞系SGC7901缺氧时MKP-1表达上调, MKP-1可抑制HIF-1转录活性并下调其下游基因VEGF的表达.
缺氧状态下丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1在胃癌细胞系SGC7901中的过表达及其意义
【摘 要】
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目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1 (MKP-1)在缺氧胃癌细胞系SGC7901中的表达及对缺氧诱导因子-1(HIF-1)的影响. 方法采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR) 和Western 印迹检测MKP-1在常氧及缺氧状态下胃癌细胞系SGC7901中的表达;借助DNA重组技术构建MKP-1基因的正义真核表达载体;利用脂质体将正义真核表达载体和空载体转入SGC7901细胞;双荧光素
【机 构】
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710032,西安,第四军医大学西京医院消化病研究所,710032,西安,第四军医大学西京医院消化病研究所,710032,西安,第四军医大学西京医院消化病研究所,710032,西安,第四军医大学西京医
【出 处】
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中华医学杂志
【发表日期】
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2004年84期
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