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【摘要】目的：探讨肾浊清颗粒剂对慢性肾衰竭（CRF）大鼠血清IL-6、CRP的影响。方法：将Waster大鼠60只随机分为4组,正常组、模型组、肾浊清颗粒剂组、尿毒清组。用腺嘌呤造模。造模第23天开始治疗，治疗31天后测24小时尿蛋白定量，处死大鼠，称重，检测Bur、Scr、Hb、IL-6、CRP。结果：第23天模型组与正常组比较，BUN、Scr显著性增高(P< 0.01)，造模成功。治疗后模型组仍显著增高，肾浊清组在降低BUN、Scr、24小时尿蛋白上与模型组比较显著降低（P<0.01），与尿毒清组比较无显著差异（P<0.05）；肾浊清组升高Hb上优于尿毒清组（P< 0.05）；治疗后肾浊清组、尿毒清组CRP、TNF-α明显低于模型组( P<0.01)，CRP、TNF-α的改变优于对照组( P<0.05) 。结论：肾浊清颗粒剂能明显改善慢性肾衰竭大鼠肾功能，其机理可能与其减轻慢性肾衰竭微炎症反应有关。
【关键词】慢性肾衰竭;肾浊清颗粒;IL-6CRP
【中图分类号】R635 【文献标识码】B 【文章编号】1005-0515(2011)05-0316-02
CRF体内广泛存在微炎症状态 ，并且是 CRF 并发营养不良、动脉粥样硬化、贫血等并发症的重要原因[1]。本研究通过建立CRF大鼠模型，观察中药肾浊清颗粒对微炎症因子IL-6、CRP的影响，探讨其延缓CRF进展的作用机制。
1 材料与方法
1.1 实验材料:
1.1.1 实验动物:Wistar雄性大鼠60只（体重180-240g）。由昆明动物研究所提供。随机分为正常组、模型组、对照组（尿毒清）和治疗组（肾浊清颗粒）。
1.1.2 药物:肾浊清由云南理想药业提供，每包10g。尿毒清颗粒由广州康臣药业有限公司提供（20061022 ），腺嘌呤（Adenine）：50g/瓶，美国SIGMA公司生产。
1.1.3 主要仪器与试剂:全自动生化仪，微量离心机，CRP 检测:采用免疫比浊法测定。试剂盒购自上海太阳生物工程有限公司。IL-6检测:采用放免法试剂盒购自解放军总医院科技开发中心。
1.2 实验方法
1.2.1 造模方法:参照文献[2]。60只大鼠购入后，适应性喂养一周，称重，随机分为4组, 每组15只, 1组：正常组；2组： 模型组；3组：肾浊清颗粒剂组（治疗组）；4组：尿毒清组（对照组）。除1组以外，用腺嘌呤给大鼠灌胃。腺嘌呤用前用生理盐水配成浓度25%混浊液, 按250mg/kg/d给予, 1组给予等量生理盐水灌胃, 造模用药21天, 于第22天1组、2组用代谢笼收集24小时尿, 测尿蛋白，并从眼底静脉丛取血1.5-2ml, 测BUN、Scr、Hb，以证实造模成功。
1.2.2 给药 造模结束后, 即第23天开始治疗，肾浊清颗粒剂配成30%混浊液，尿毒清研后配成20%溶液。治疗组给予“肾浊清颗粒” 3.35g·kg-1·d-1灌胃，对照组给予“尿毒清”1.18g·kg-1·d-1 灌胃，正常组和模型组2ml生理盐水灌胃,共治疗31天, 治疗过程中大鼠自由进食、水。
1.2.3 观察指标:观察并记录各组大鼠一般情况 (体重、毛色、进食、尿量) 、治疗后BUN、Scr、Hb、24小时尿蛋白定量、IL-6、CRP。
1.2.4 统计学处理:数据用X±s 表示 ,组间比较用 t 检验。采用 SPSS10.0 统计软件处理。
2 结果
2.1 一般情况:正常组：外观、活动正常 ,体重逐渐增大 ,到实验结束时达(240 -260) g ,动物无死亡。模型组、治疗组、对照组大鼠造模后开始出现明显多尿、食量减少、毛色发黄、弓背，并出现明显消瘦、眼珠红色变淡，有大鼠死亡，模型组死亡5只，死亡率 33.33 %；治疗组死亡1只，死亡率 7 %，对照组死亡2只，死亡率 13.33%,2组治疗2周后大多数鼠毛皮光柔度、眼珠红色度、食量等比模型组明显改善，反射性排尿不减少反增多，大多数鼠症状已出现好转。
2.2 各组大鼠肾功能、24小时尿蛋白定量见表 1。
表1 各组大鼠肾功能、24小时尿蛋白定量 (X±S)
组别 例数 BUN（mmol/L）Scr (μmol/L) 24小时尿蛋白定量（g/L）
正常组 15 6.09±2.0763.79±14.68 0.62±0.21
模型组 10 26.34±6.98Δ129.45±30.72Δ13.37±3.36Δ
治疗组 14 10.79±5.81Δ※☆95.22±27.65※Δ☆ 7.61±1.56※☆
对照组 13 11.62±6.26Δ※98.21±29.06※Δ 9.08±1.66Δ※
注：与正常组比较ΔP<0.01，与模型组相比※P<0.01；与对照组相比☆P＞0.05，# P<0.05
2.3 各组大鼠治疗8周后血中IL-6、CRP的变化(见表2)
表2 各组大鼠治疗8周后血中IL-6、CRP的变化(X±S)
组别 例数 IL-6（ng/ml）CRP (mg/L)
正常组 1594.58±26.377.48±2.36
模型组 10281.81±52.02Δ23.19±6.98Δ
治疗组 14115.79±38.26※☆○12.08±5.66※☆○Δ
对照组 13158.64±40.32Δ☆ 17.21±5.97Δ☆
注：与正常组比较ΔP<0.01，※ P<0.05；与模型组相比☆P<0.05；与对照组相比○P<0.05
3 讨论
研究表明，慢性肾功能衰竭(CRF)患者体内多种炎症因子增高 ，存在 “微炎症状态”[3]，微炎症状态是指非微生物感染，表现为全身循环中炎性蛋白(如 CRP) 、炎症细胞因子(如 IL-6 、TNF- α等)轻度持续增高 ,导致患者各种并发症的非显性炎症 。微炎症可能单独或作为上述机制的下游环节在CRF的发病机制中起关键作用，参与CRF的发病机制。因此，深入研究微炎症病理生理机制，对于延缓肾脏病进展具有重要的意义。
IL-6是与肾小球疾病关系最为密切的炎症细胞因子，引起组织细胞的损伤。它的异常产生和表达在肾小球肾炎的发病中起重要作用。它是机体主要介导炎症反应的细胞因子，对免疫应答、急性期反应、造血和神经系统有重要作用。IL-6可导致体液免疫功能亢进，引起机体免疫调节紊乱，促使MC增殖与系膜的纤维化，促进肾小球硬化。另外，IL-6刺激MC合成并释放大量炎症因子刺激MC收缩，降低肾小球滤过率，造成肾小球免疫病理损伤，加重肾脏炎症损害[4]。抑制体内炎性细胞因子IL-6的合成，可使肾炎缓解。
CRP主要由肝脏产生，正常情况下以微量形成存在于正常人的血清中(10ms／L以下，平均3．5ms／L)。它作为一种炎症反应蛋白，是一种非特异性炎症反应的标志物，也是慢性炎症状态下细胞因子产生的标志，因而是慢性炎症的最敏感而特异的指标[5]。
中医虽无微炎症状态的病名 ，但微炎症状态的病理物质是炎症因子 ，因此可归为中医的“浊毒”、“湿热”范围。CRF本质属于虚证范围 ，由于脾肾虚损，往往伴有不同程度的湿浊潴留，也就是有不同程度的炎症因子增高。微炎症状态为属于 CRF 的“标证”[6]。
因此，改善慢性肾衰竭微炎症状态应从健脾补肾、祛湿着手。肾浊清颗粒剂以人参、熟地为君，二者合用补脾肾之虚损，益气血之不足；配黄芪增益气健脾之功，淫羊藿补肾助阳，枸杞子补肾填精为臣药；当归补血活血，白术健脾祛湿，助参地补益气血、健脾益肾，同时有祛瘀生新、祛湿化浊之功，共为臣药；草果仁芳香化湿醒脾亦为本方臣药；大黄攻积导滞、解毒活血，水蛭活血化瘀，去瘀血而不伤新血为佐；黄芩清热化湿解毒兼制约草果等药的辛烈之性。诸药配伍以补脾肾为主，化湿解毒为辅，具扶正祛邪之功，补得消则补而不滞，消得补则不伤正，补泻兼施以补为主，紧扣病机以达治疗之功。
肾浊清颗粒剂具有明显改善CRF大鼠肾功能、降低24小时尿蛋白定量、缓解贫血状态，降低血中IL-6、CRP的作用，并进而通过此途径使CRF微炎症状态得以改善，控制肾小球硬化的发生和进展，从而延缓CRF进展。
参考文献
[1] 陈江华,何强,徐莹. 维持性血液透析患者微炎症状态的认识和防治[J]. 中华肾脏病杂志,2005,21 (2) :117-118
[2] 周小舟，张盛光，阳晓，等.腺嘌呤所致CRF大鼠的机理研究.基础医学与临床，1997，17（1）：54-57
[3] Schimig M,EisenhandtA,RitzE.Themicrinfammator ystateof uremia[J].BloodPurif,2000,18 (4) :327-332
[4] Chen WP, Chen A, Lin CY. In vitro effects of intedeukinson human Mcssan-gial cells:implicationsfor glomerulonephritis. J Pathol,1995,173(3) :327-337
[5] Kluth DC, Rees,AJ. New approaches to modify glomerular inflammation. J Nephrol, 1999, 12(2): 66-75
[6] 朱辟疆，周逊，赵华，刘永平，邱建军等.慢性肾功能衰竭微炎症状态与中医证型关系研究，现代中西医结合杂志，2008.，6（17），256-258
作者单位：650021 云南中医学院第一附属医院
【关键词】慢性肾衰竭;肾浊清颗粒;IL-6CRP
【中图分类号】R635 【文献标识码】B 【文章编号】1005-0515(2011)05-0316-02
CRF体内广泛存在微炎症状态 ，并且是 CRF 并发营养不良、动脉粥样硬化、贫血等并发症的重要原因[1]。本研究通过建立CRF大鼠模型，观察中药肾浊清颗粒对微炎症因子IL-6、CRP的影响，探讨其延缓CRF进展的作用机制。
1 材料与方法
1.1 实验材料:
1.1.1 实验动物:Wistar雄性大鼠60只（体重180-240g）。由昆明动物研究所提供。随机分为正常组、模型组、对照组（尿毒清）和治疗组（肾浊清颗粒）。
1.1.2 药物:肾浊清由云南理想药业提供，每包10g。尿毒清颗粒由广州康臣药业有限公司提供（20061022 ），腺嘌呤（Adenine）：50g/瓶，美国SIGMA公司生产。
1.1.3 主要仪器与试剂:全自动生化仪，微量离心机，CRP 检测:采用免疫比浊法测定。试剂盒购自上海太阳生物工程有限公司。IL-6检测:采用放免法试剂盒购自解放军总医院科技开发中心。
1.2 实验方法
1.2.1 造模方法:参照文献[2]。60只大鼠购入后，适应性喂养一周，称重，随机分为4组, 每组15只, 1组：正常组；2组： 模型组；3组：肾浊清颗粒剂组（治疗组）；4组：尿毒清组（对照组）。除1组以外，用腺嘌呤给大鼠灌胃。腺嘌呤用前用生理盐水配成浓度25%混浊液, 按250mg/kg/d给予, 1组给予等量生理盐水灌胃, 造模用药21天, 于第22天1组、2组用代谢笼收集24小时尿, 测尿蛋白，并从眼底静脉丛取血1.5-2ml, 测BUN、Scr、Hb，以证实造模成功。
1.2.2 给药 造模结束后, 即第23天开始治疗，肾浊清颗粒剂配成30%混浊液，尿毒清研后配成20%溶液。治疗组给予“肾浊清颗粒” 3.35g·kg-1·d-1灌胃，对照组给予“尿毒清”1.18g·kg-1·d-1 灌胃，正常组和模型组2ml生理盐水灌胃,共治疗31天, 治疗过程中大鼠自由进食、水。
1.2.3 观察指标:观察并记录各组大鼠一般情况 (体重、毛色、进食、尿量) 、治疗后BUN、Scr、Hb、24小时尿蛋白定量、IL-6、CRP。
1.2.4 统计学处理:数据用X±s 表示 ,组间比较用 t 检验。采用 SPSS10.0 统计软件处理。
2 结果
2.1 一般情况:正常组：外观、活动正常 ,体重逐渐增大 ,到实验结束时达(240 -260) g ,动物无死亡。模型组、治疗组、对照组大鼠造模后开始出现明显多尿、食量减少、毛色发黄、弓背，并出现明显消瘦、眼珠红色变淡，有大鼠死亡，模型组死亡5只，死亡率 33.33 %；治疗组死亡1只，死亡率 7 %，对照组死亡2只，死亡率 13.33%,2组治疗2周后大多数鼠毛皮光柔度、眼珠红色度、食量等比模型组明显改善，反射性排尿不减少反增多，大多数鼠症状已出现好转。
2.2 各组大鼠肾功能、24小时尿蛋白定量见表 1。
表1 各组大鼠肾功能、24小时尿蛋白定量 (X±S)
组别 例数 BUN（mmol/L）Scr (μmol/L) 24小时尿蛋白定量（g/L）
正常组 15 6.09±2.0763.79±14.68 0.62±0.21
模型组 10 26.34±6.98Δ129.45±30.72Δ13.37±3.36Δ
治疗组 14 10.79±5.81Δ※☆95.22±27.65※Δ☆ 7.61±1.56※☆
对照组 13 11.62±6.26Δ※98.21±29.06※Δ 9.08±1.66Δ※
注：与正常组比较ΔP<0.01，与模型组相比※P<0.01；与对照组相比☆P＞0.05，# P<0.05
2.3 各组大鼠治疗8周后血中IL-6、CRP的变化(见表2)
表2 各组大鼠治疗8周后血中IL-6、CRP的变化(X±S)
组别 例数 IL-6（ng/ml）CRP (mg/L)
正常组 1594.58±26.377.48±2.36
模型组 10281.81±52.02Δ23.19±6.98Δ
治疗组 14115.79±38.26※☆○12.08±5.66※☆○Δ
对照组 13158.64±40.32Δ☆ 17.21±5.97Δ☆
注：与正常组比较ΔP<0.01，※ P<0.05；与模型组相比☆P<0.05；与对照组相比○P<0.05
3 讨论
研究表明，慢性肾功能衰竭(CRF)患者体内多种炎症因子增高 ，存在 “微炎症状态”[3]，微炎症状态是指非微生物感染，表现为全身循环中炎性蛋白(如 CRP) 、炎症细胞因子(如 IL-6 、TNF- α等)轻度持续增高 ,导致患者各种并发症的非显性炎症 。微炎症可能单独或作为上述机制的下游环节在CRF的发病机制中起关键作用，参与CRF的发病机制。因此，深入研究微炎症病理生理机制，对于延缓肾脏病进展具有重要的意义。
IL-6是与肾小球疾病关系最为密切的炎症细胞因子，引起组织细胞的损伤。它的异常产生和表达在肾小球肾炎的发病中起重要作用。它是机体主要介导炎症反应的细胞因子，对免疫应答、急性期反应、造血和神经系统有重要作用。IL-6可导致体液免疫功能亢进，引起机体免疫调节紊乱，促使MC增殖与系膜的纤维化，促进肾小球硬化。另外，IL-6刺激MC合成并释放大量炎症因子刺激MC收缩，降低肾小球滤过率，造成肾小球免疫病理损伤，加重肾脏炎症损害[4]。抑制体内炎性细胞因子IL-6的合成，可使肾炎缓解。
CRP主要由肝脏产生，正常情况下以微量形成存在于正常人的血清中(10ms／L以下，平均3．5ms／L)。它作为一种炎症反应蛋白，是一种非特异性炎症反应的标志物，也是慢性炎症状态下细胞因子产生的标志，因而是慢性炎症的最敏感而特异的指标[5]。
中医虽无微炎症状态的病名 ，但微炎症状态的病理物质是炎症因子 ，因此可归为中医的“浊毒”、“湿热”范围。CRF本质属于虚证范围 ，由于脾肾虚损，往往伴有不同程度的湿浊潴留，也就是有不同程度的炎症因子增高。微炎症状态为属于 CRF 的“标证”[6]。
因此，改善慢性肾衰竭微炎症状态应从健脾补肾、祛湿着手。肾浊清颗粒剂以人参、熟地为君，二者合用补脾肾之虚损，益气血之不足；配黄芪增益气健脾之功，淫羊藿补肾助阳，枸杞子补肾填精为臣药；当归补血活血，白术健脾祛湿，助参地补益气血、健脾益肾，同时有祛瘀生新、祛湿化浊之功，共为臣药；草果仁芳香化湿醒脾亦为本方臣药；大黄攻积导滞、解毒活血，水蛭活血化瘀，去瘀血而不伤新血为佐；黄芩清热化湿解毒兼制约草果等药的辛烈之性。诸药配伍以补脾肾为主，化湿解毒为辅，具扶正祛邪之功，补得消则补而不滞，消得补则不伤正，补泻兼施以补为主，紧扣病机以达治疗之功。
肾浊清颗粒剂具有明显改善CRF大鼠肾功能、降低24小时尿蛋白定量、缓解贫血状态，降低血中IL-6、CRP的作用，并进而通过此途径使CRF微炎症状态得以改善，控制肾小球硬化的发生和进展，从而延缓CRF进展。
参考文献
[1] 陈江华,何强,徐莹. 维持性血液透析患者微炎症状态的认识和防治[J]. 中华肾脏病杂志,2005,21 (2) :117-118
[2] 周小舟，张盛光，阳晓，等.腺嘌呤所致CRF大鼠的机理研究.基础医学与临床，1997，17（1）：54-57
[3] Schimig M,EisenhandtA,RitzE.Themicrinfammator ystateof uremia[J].BloodPurif,2000,18 (4) :327-332
[4] Chen WP, Chen A, Lin CY. In vitro effects of intedeukinson human Mcssan-gial cells:implicationsfor glomerulonephritis. J Pathol,1995,173(3) :327-337
[5] Kluth DC, Rees,AJ. New approaches to modify glomerular inflammation. J Nephrol, 1999, 12(2): 66-75
[6] 朱辟疆，周逊，赵华，刘永平，邱建军等.慢性肾功能衰竭微炎症状态与中医证型关系研究，现代中西医结合杂志，2008.，6（17），256-258
作者单位：650021 云南中医学院第一附属医院