【摘 要】
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目的 观察外源性降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)在大鼠BMSCs迁移中的作用及对VEGF、血管黏附分子1(vascular cell adhesion molecule 1,VCAM-1)表
【机 构】
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南方医科大学南方医院创伤骨科,广州,510515
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目的 观察外源性降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)在大鼠BMSCs迁移中的作用及对VEGF、血管黏附分子1(vascular cell adhesion molecule 1,VCAM-1)表达的影响,探讨CGRP通过BMSCs促进血管生成的作用机制.方法 全骨髓法分离、培养SD大鼠BMSCs,采用Western blot法于传代培养1、2、3周时检测BMSCs中CGRP受体(CGRP receptor,CGRPR)蛋白的表达.使用浓度为1×10-8 mol/L的CGRP作用于BMSCs作为实验组,单纯BMSCs作为对照组,在培养72 h时采用细胞趋化实验检测CGRP对BMSCs迁移的影响；在培养1、3、5、7d采用实时荧光定量PCR检测CGRP作用后VCAM-1 mRNA的表达变化,采用免疫细胞化学染色、Western blot法检测CGRP作用后VEGF的表达变化.结果 Western blot检测示BMSCs稳定表达CGRPR,2周时表达最高.细胞趋化实验显示,实验组CGRP刺激后穿膜迁移细胞数(3.20±1.77)个/HP,较对照组(1.11±0.49)个/HP明显增多(t=4.230,P=0.001).实时荧光定量PCR检测示,实验组VCAM-1 mRNA表达随时间延长逐渐增加,7d时最高；实验组3、5、7d的VCAM-1 mRNA表达量与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).免疫细胞化学染色示,培养1、3d两组均无阳性染色；培养5、7d实验组VEGF染色呈阳性,对照组无阳性染色.Western blot检测示,培养1、3d两组均未检测到VEGF蛋白表达;培养5、7d实验组VEGF蛋白表达量均明显高于对照组(P＜0.05)；实验组5d的VEGF蛋白表达量明显高于7 d (P＜ 0.05).结论 CGRP能促进BMSCs迁移及VEGF表达,这可能是CGRP调节骨内部血流变化而影响骨代谢的机制之一.
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