【摘 要】
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目的:获得粉尘螨Derf2 cDNA克隆及亚克隆,并进行测序.方法:设计合成引物,从粉尘螨螨体中提取RNA,经RT-PCR获得cDNA,PCR扩增目的片段经纯化回收后克隆至pMD-18T,转化大肠杆菌E
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目的:获得粉尘螨Derf2 cDNA克隆及亚克隆,并进行测序.方法:设计合成引物,从粉尘螨螨体中提取RNA,经RT-PCR获得cDNA,PCR扩增目的片段经纯化回收后克隆至pMD-18T,转化大肠杆菌E.coli JM109,经PCR初筛挑选阳性克隆并测序,将PCR筛检阳性重组子及pET-32a(+)表达载体分别用Sac I和Not Ⅰ双酶切,连接转化至E coli Competent Cell JM 109中过夜培养,挑选菌落进行酶切鉴定.结果:从粉尘螨基因组RNA中扩增出Der f 2 cD-NA片段,成功构建pET-32a(+)-Der f 2亚克隆,酶切产物的大小与预期相符.结论:成功地对粉尘螨Der f 2 cDNA进行体外扩增并构建pET-32a(+)-Der f 2亚克隆.
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