【摘 要】
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为探究重组产气荚膜梭菌α毒素对家兔的安全性和免疫保护效力,本研究构建了含产气荚膜梭菌α毒素基因的重组质粒pVL1393-CPA,并通过BD BaculoGoldTM转染试剂盒共转染Sf9细胞,噬斑纯化单克隆重组病毒以High 5细胞进行表达,表达重组蛋白经SDS-PAGE和western blot检测均获得了45 ku的目的蛋白。将重组α毒素用0.1%甲醛溶液灭活脱毒后与ISA 206 VG佐剂乳
【基金项目】
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呼和浩特市重大科技专项（2021-农-重-6）；
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为探究重组产气荚膜梭菌α毒素对家兔的安全性和免疫保护效力,本研究构建了含产气荚膜梭菌α毒素基因的重组质粒pVL1393-CPA,并通过BD BaculoGoldTM转染试剂盒共转染Sf9细胞,噬斑纯化单克隆重组病毒以High 5细胞进行表达,表达重组蛋白经SDS-PAGE和western blot检测均获得了45 ku的目的蛋白。将重组α毒素用0.1%甲醛溶液灭活脱毒后与ISA 206 VG佐剂乳化制备亚单位疫苗（抗原含量为20μg/mL）,并以40μg/只肌肉注射1.5 kg～2.0 kg家兔,同时设立PBS对照组,注射后连续观察7 d;结果显示该疫苗对家兔的安全性良好。随后以20μg/只肌肉注射家兔,免疫21 d后以相同剂量加强免疫一次,同时设立佐剂对照组和毒素对照组,首免21 d、二免14 d时采血分离血清,应用ELISA方法检测免疫血清IgG抗体效价,同时进行二免血清小鼠体内毒素中和试验以及家兔攻毒保护试验,以评价本疫苗对家兔的免疫保护效力;结果显示,疫苗免疫组家兔血清IgG抗体效价与佐剂对照组和毒素对照组的差异极显著（P＜0.001）,二免血清对A型产气荚膜梭菌毒素小鼠体内的中和效价为32,疫苗免疫组家兔攻毒后均健活,攻毒保护率为100%,佐剂对照组和毒素对照组家兔死亡率则为100%。上述结果表明,本研究制备的重组产气荚膜梭菌α毒素疫苗对家兔具有良好的安全性和免疫保护效力,为开发其他各型梭菌亚单位疫苗提供了重要借鉴。
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