【摘 要】
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目的 建立对高致病性猪链球菌2型毒力基因SalK、virB4-89K、cps2J同步检测的多重实时荧光定量PCR检测方法.方法 根据SalK、virB4-89K、cps2J基因保守区域设计并合成3对引物及
【机 构】
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南京军区军事医学研究所,江苏南京210002;南京医科大学基础医学院,江苏南京210029;南京军区军事医学研究所,江苏南京,210002
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目的 建立对高致病性猪链球菌2型毒力基因SalK、virB4-89K、cps2J同步检测的多重实时荧光定量PCR检测方法.方法 根据SalK、virB4-89K、cps2J基因保守区域设计并合成3对引物及其探针；通过反应体系和扩增条件优化,建立快速鉴定高致病性猪链球菌2型的方法,并对方法的特异性、敏感性、重复性指标进行评估.结果 反应体系具有良好的扩增效率,全部扩增检测可在60 min内完成.SalK、virB4-89K、cps2J基因检测灵敏度分别为19 cfu/ml、27 cfu/ml和32 cfu/ml.重复性试验中变异系数均小于3％.用该方法考核33株猪链球菌,包括1/2型、1型、3型至33型,以及9株常见对照菌株,仅猪链球菌1/2型检测到cps2J基因荧光信号增强.对疫情现场获得的SS2感染者血液进行检测,3个基因均阳性.结论 建立的多重实时荧光定量PCR方法可快速检测高致病性猪链球菌2型,并能鉴定是否含有89K毒力岛基因SalK、virB4-89K,具有敏感、特异、重复性好的特点.
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