【摘 要】
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目的研究建立重组肠激酶融合蛋白纯化工艺的方法。方法利用大肠杆菌发酵表达肠激酶轻链融合蛋白DsbA-rEKL,超声破碎法破碎菌体,离心后收集包涵体。6 mol盐酸胍、5 mmol EDTA
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目的研究建立重组肠激酶融合蛋白纯化工艺的方法。方法利用大肠杆菌发酵表达肠激酶轻链融合蛋白DsbA-rEKL,超声破碎法破碎菌体,离心后收集包涵体。6 mol盐酸胍、5 mmol EDTA溶解包涵体,在胱氨酸存在的情况下,以脉冲方式复性。经IMAC层析及DEAE层析纯化,复性的融合蛋白做酶切实验。结果融合蛋白复性在5 mmol/L胱氨酸存在下、脉冲加量0.03 mg/ml和复性终蛋白浓度0.3 mg/ml为最佳复性方案。经IMAC层析及DEAE层析纯化,rEKL纯度可达90%以上。每升发酵液经复性及纯化后,可得rEKL 60 mg以上。结论实现了大规模生产rEKL的目的,使以融合蛋白表达rPA等药用蛋白成为现实。
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