探讨整合素β3受体信号途径在结缔组织生长因子(CTGF)促进肺动脉平滑肌细胞增殖、迁移和细胞外基质基因表达中的作用机制研究。
方法分离并培养SD大鼠肺动脉中膜平滑肌细胞,实验使用第3~7代细胞;细胞分为3组:(1)空白组:不加任何刺激因子;(2)CTGF组:培养体系中加入CTGF(50 ng/ml);(3)CTGF+整合素β3抗体组:培养体系中加入CTGF(50 ng/ml)及整合素β3抗体(10 mg/L)。以上3组细胞中加入CTGF(50 ng/ml)和浓度分别为0、5、10、15、20 mg/L的整合素β3抗体,共同孵育24、48、72及96 h,采用WST-1细胞增殖试剂检测细胞增殖的变化;应用Transwell方法在相差显微镜下观察细胞迁移数目的变化;应用荧光定量RT-PCR检测Ⅰ型胶原α1、Ⅲ型胶原α1和纤维连接蛋白1 mRNA表达;应用Western blot和免疫组化检测纤维连接蛋白表达。
结果整合素β3抗体对CTGF促肺动脉平滑肌细胞增殖有明显抑制作用(P<0.05),其中整合素β3抗体浓度为10 mg/L时抑制率最高。CTGF组肺动脉平滑肌细胞迁移数目(25.00±1.57)个,较空白组(11.00±2.08)个多(P<0.01);CTGF+整合素β3抗体组肺动脉平滑肌细胞迁移数目(17.00±4.16)个,较CTGF组少(P<0.05);与对照组比较,CTGF组肺动脉平滑肌细胞Ⅰ型胶原α1(4.28±0.33)、Ⅲ型胶原α1(4.41±0.35)和纤维连接蛋白1(4.05±0.33) mRNA表达增加(P<0.01),呈时间依赖性;与CTGF组比较,CTGF+整合素β3抗体组Ⅰ型胶原α1(3.38±0.30)、Ⅲ型胶原α1(3.40±0.30)和纤维连接蛋白1(3.12±0.29) mRNA表达减少(P<0.05),但较对照组表达增加(P<0.05);与对照组比较,CTGF组能明显增加肺动脉平滑肌细胞纤维连接蛋白表达(P<0.01),整合素β3抗体能抑制CTGF诱导的纤维连接蛋白表达(P<0.01),但纤维连接蛋白表达较对照组仍有增加(P<0.01)。
结论整合素β3信号途径能介导CTGF诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖、迁移和细胞外基质基因的表达,CTGF-整合素β3信号途径可能在肺血管重构中起重要作用。