小鼠endostatin基因的克隆、表达及表达产物的活性鉴定

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目的克隆并表达小鼠endostatin基因,并初步检测其血管生长抑制功能,为胶质瘤的基因治疗探索新的途径. 方法从小鼠肝组织用RT-PCR法扩增 endostatin基因,重组入pUC19质粒, 经测序证实无误后,重组入表达载体pDH,经温度诱导表达,并用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)实验检测表达产物活性. 结果从小鼠肝组织中成功扩增到endostatin基因,测序与报道序列一致. 重组进pDH后经温度诱导表达,在S DS-PAGE电泳上得到一条新的蛋白表达带,分子质量为20 ku. 纯化后的蛋白能明显抑制CAM 的血管生长. 结论成功构建了小鼠endostatin cDNA的重组克隆pDH-Endo,并在大肠杆菌中获得高效表达. 在CAM 实验中表明纯化后的蛋白具有明显血管抑制作用. 为利用endostatin进行脑胶质瘤等实体瘤的基因治疗奠定了实验基础 .
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