论文部分内容阅读
摘 要：本文采用高校液相测定了氨苄西林片剂中氨苄西林的含量，固定相为：安捷伦Cl8（4.6 mm×250 mm，5um），乙腈-0.2mol/L磷酸二氢钾溶液-醋酸-水 （103：50：0.2：850）为流动相，检测波长为254nm，流速1.0mL·min-1，柱温：30℃。氨苄西林在0.1～1.5mg·mL-1范围内呈良好的线性关系。氨苄西林的平均回收率为99.3%，RSD为0.63%（n=6）；此方法简便、准确、重现性好，可用于氨苄西林片剂中氨苄西林的含量测定。
关键词：氨苄西林片剂；氨苄西林；含量
氨苄西林为广谱半合成青霉素，毒性极低，对白喉杆菌、破伤风杆菌和放线菌其效能基本和青霉素相同。氨苄西林主要用于敏感菌所致的泌尿系统、副伤寒、泌尿道、呼吸道感染、呼吸系统、胆道、肠道感染以及脑膜炎、心内膜炎等。本文采用高校液相测定了氨苄西林片剂中氨苄西林的含量。
1 仪器与试药
Kertone lab day 20实验室纯水机（科尔顿（中国）有限公司）；安捷伦 1290 Infinity 二元液相色谱系统（安捷伦科技（中国）有限公司）；ULABO实验室温度控制器（优莱博技术（北京）有限公司）；UV-9600紫外/可见分光光度计（北京北分瑞利分析仪器（集团）公司）；丹佛TB-215D分析天平（北京晨曦勇创科技有限公司）；HK-3C型台式精密酸度计（北京华科仪科技股份有限公司）；US-1.3M超声波清洗器（中科仪（北京）仪器有限公司）。氨苄西林对照品由中国药品生物制品检定所提供。十六烷基三甲基溴化铵（南京维之诚化学试剂有限公司）、磷酸二氢钾（天津市康科德科技有限公司）、氢氧化钾（南京维之诚化学试剂有限公司）、乙酸铵（天津市康科德科技有限公司）、十二烷基硫酸钠（南京维之诚化学试剂有限公司）、磷酸（天津市康科德科技有限公司）、三乙胺（南京维之诚化学试剂有限公司）、醋酸（山东浩中化工科技有限公司）、乙腈（天津市康科德科技有限公司）、甲醇（山东浩中化工科技有限公司）、磷酸二氢铵（山东浩中化工科技有限公司）。
2 含量测定
2.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[1-5]。色谱柱为安捷伦Cl8规格为（4.6mm×250mm，5um）；乙腈-0.2mol/L磷酸二氢钾溶液-醋酸-水（103：50：0.2：850）为流动相；检测波长为254nm。理论板数按氨苄西林峰计算应不得低于2000。
2.2 供试品溶液的制备
取氨苄西林片剂，研细，精密称取，精密加入流动相30mL，超声提取30分钟，放冷，过滤，滤液转移至50毫升容量瓶内用流动相定容，摇匀，即得。
2.3 对照品溶液的制备
精密称取氨苄西林对照品约10mg，用流动相溶解并稀释成每1ml中含0.3mg的溶液，作为对照溶液。
2.4 阴性溶液的制备
依照处方取氨苄西林片剂辅料，按样品制备工艺制成阴性对照样品，照供试品溶液的制备方法制成阴性液，依上述方法测定，结果在氨苄西林出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.5 准曲线的制备
制备浓度为0.1、0.3、0.5、0.7、0.9、1.1、1.3、1.5mg·mL-1的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入HPLC，记录色谱图。以峰面积积分值A（μg）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，氨苄西林对照品在0.1～1.5mg·mL-1范围内线性关系良好。
2.6 精密度试验
依照2.4项下制备对照品溶液，精密吸取氨苄西林对照品溶液10μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.66%。结果表明，本实验精密度良好。
2.7 重现性试验
分别称取同批氨苄西林片剂样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.65%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。
2.8 稳定性试验
依照2.3项下供试品制备方法制备供试品溶液，分别在0，2，4，6小时精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，进样测定，供试品氨苄西林峰面积积分值的RSD为0.56%。结果表明氨苄西林至少在6小时内稳定。
2.9 回收率试验
采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分精密添加一定量的氨苄西林对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量（同时测定样品含量），计算回收率。6次测定的平均回收率为99.3%，RSD为0.63%。
2.10 样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定氨苄西林片剂三批样品中氨苄西林的含量，含量标示量的99.8%、100.2%、99.3%。
3 讨论
分别考察乙腈-0.2mol/L磷酸二氢钾溶液-醋酸-水 （103：50：0.2：850），缓冲盐溶液（内含0.01mol.L-1十六烷基三甲基溴化铵和0.01mol.L-1磷酸二氢钾）（用氢氧化钾试液调节pH值为6.5）-乙腈（50∶50），0.067moloL-1磷酸二氢铵溶液-乙腈-三乙胺（60∶40：0.02），0.01moloL-1乙酸铵溶液（pH5.1）-甲醇（40：60），乙腈-0.08%磷酸溶液（20：80），乙腈-甲醇-水（10：5：85）（用磷酸调PH值为3.0），0.1mol/L磷酸二氢钾-0.018mol/L十二烷基硫酸钠-甲醇-乙腈（275：275：200：250）（用磷酸调pH值至2.6），磷酸盐缓冲液（0.01mol/L磷酸氢二铵溶液，用磷酸调节pH值6.0）∶乙腈（90∶10）不同比例的流动相，结果以乙腈-0.2mol/L磷酸二氢钾溶液-醋酸-水 （103：50：0.2：850）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用乙腈-0.2mol/L磷酸二氢钾溶液-醋酸-水 （103：50：0.2：850）为流动相。此方法简便、准确、重现性好，可用于氨苄西林片剂中氨苄西林的含量测定。氨苄西林片剂中氨苄西林的含量应为标示量的95-105%。
参考文献
[1]冯秀珍，王臣芳，赵士冶，谢辉.反相高效液相色谱法分析注射用氨苄西林钠有关物质[J].中国现代药物应用，2010（12）.
[2]张琳，曹晓云.氨苄西林、氨苄西林钠及注射用氨苄西林钠中二聚体及其他相关物质的HPLC检查法[J].天津药学，2008（3）.
[3]刘维华，夏淑鸿，赵娟，高建龙，武晓宏.HPLC法测定生鲜乳中氨苄西林残留的方法研究[J].饲料广角，2011（20）.
[4]徐帆，冯恩富，余昉，徐贵丽.HPLC法测定人血浆中氨苄西林含量及其药动学研究[J].中国药房，2008（14）.
[5]刘浩，杨美成，仇仕林.HPLC法同时测定注射用氨苄西林钠/氯唑西林钠的含量[J].中国抗生素杂志，2006（1）.
关键词：氨苄西林片剂；氨苄西林；含量
氨苄西林为广谱半合成青霉素，毒性极低，对白喉杆菌、破伤风杆菌和放线菌其效能基本和青霉素相同。氨苄西林主要用于敏感菌所致的泌尿系统、副伤寒、泌尿道、呼吸道感染、呼吸系统、胆道、肠道感染以及脑膜炎、心内膜炎等。本文采用高校液相测定了氨苄西林片剂中氨苄西林的含量。
1 仪器与试药
Kertone lab day 20实验室纯水机（科尔顿（中国）有限公司）；安捷伦 1290 Infinity 二元液相色谱系统（安捷伦科技（中国）有限公司）；ULABO实验室温度控制器（优莱博技术（北京）有限公司）；UV-9600紫外/可见分光光度计（北京北分瑞利分析仪器（集团）公司）；丹佛TB-215D分析天平（北京晨曦勇创科技有限公司）；HK-3C型台式精密酸度计（北京华科仪科技股份有限公司）；US-1.3M超声波清洗器（中科仪（北京）仪器有限公司）。氨苄西林对照品由中国药品生物制品检定所提供。十六烷基三甲基溴化铵（南京维之诚化学试剂有限公司）、磷酸二氢钾（天津市康科德科技有限公司）、氢氧化钾（南京维之诚化学试剂有限公司）、乙酸铵（天津市康科德科技有限公司）、十二烷基硫酸钠（南京维之诚化学试剂有限公司）、磷酸（天津市康科德科技有限公司）、三乙胺（南京维之诚化学试剂有限公司）、醋酸（山东浩中化工科技有限公司）、乙腈（天津市康科德科技有限公司）、甲醇（山东浩中化工科技有限公司）、磷酸二氢铵（山东浩中化工科技有限公司）。
2 含量测定
2.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下[1-5]。色谱柱为安捷伦Cl8规格为（4.6mm×250mm，5um）；乙腈-0.2mol/L磷酸二氢钾溶液-醋酸-水（103：50：0.2：850）为流动相；检测波长为254nm。理论板数按氨苄西林峰计算应不得低于2000。
2.2 供试品溶液的制备
取氨苄西林片剂，研细，精密称取，精密加入流动相30mL，超声提取30分钟，放冷，过滤，滤液转移至50毫升容量瓶内用流动相定容，摇匀，即得。
2.3 对照品溶液的制备
精密称取氨苄西林对照品约10mg，用流动相溶解并稀释成每1ml中含0.3mg的溶液，作为对照溶液。
2.4 阴性溶液的制备
依照处方取氨苄西林片剂辅料，按样品制备工艺制成阴性对照样品，照供试品溶液的制备方法制成阴性液，依上述方法测定，结果在氨苄西林出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.5 准曲线的制备
制备浓度为0.1、0.3、0.5、0.7、0.9、1.1、1.3、1.5mg·mL-1的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入HPLC，记录色谱图。以峰面积积分值A（μg）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，氨苄西林对照品在0.1～1.5mg·mL-1范围内线性关系良好。
2.6 精密度试验
依照2.4项下制备对照品溶液，精密吸取氨苄西林对照品溶液10μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.66%。结果表明，本实验精密度良好。
2.7 重现性试验
分别称取同批氨苄西林片剂样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.65%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。
2.8 稳定性试验
依照2.3项下供试品制备方法制备供试品溶液，分别在0，2，4，6小时精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，进样测定，供试品氨苄西林峰面积积分值的RSD为0.56%。结果表明氨苄西林至少在6小时内稳定。
2.9 回收率试验
采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分精密添加一定量的氨苄西林对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量（同时测定样品含量），计算回收率。6次测定的平均回收率为99.3%，RSD为0.63%。
2.10 样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定氨苄西林片剂三批样品中氨苄西林的含量，含量标示量的99.8%、100.2%、99.3%。
3 讨论
分别考察乙腈-0.2mol/L磷酸二氢钾溶液-醋酸-水 （103：50：0.2：850），缓冲盐溶液（内含0.01mol.L-1十六烷基三甲基溴化铵和0.01mol.L-1磷酸二氢钾）（用氢氧化钾试液调节pH值为6.5）-乙腈（50∶50），0.067moloL-1磷酸二氢铵溶液-乙腈-三乙胺（60∶40：0.02），0.01moloL-1乙酸铵溶液（pH5.1）-甲醇（40：60），乙腈-0.08%磷酸溶液（20：80），乙腈-甲醇-水（10：5：85）（用磷酸调PH值为3.0），0.1mol/L磷酸二氢钾-0.018mol/L十二烷基硫酸钠-甲醇-乙腈（275：275：200：250）（用磷酸调pH值至2.6），磷酸盐缓冲液（0.01mol/L磷酸氢二铵溶液，用磷酸调节pH值6.0）∶乙腈（90∶10）不同比例的流动相，结果以乙腈-0.2mol/L磷酸二氢钾溶液-醋酸-水 （103：50：0.2：850）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用乙腈-0.2mol/L磷酸二氢钾溶液-醋酸-水 （103：50：0.2：850）为流动相。此方法简便、准确、重现性好，可用于氨苄西林片剂中氨苄西林的含量测定。氨苄西林片剂中氨苄西林的含量应为标示量的95-105%。
参考文献
[1]冯秀珍，王臣芳，赵士冶，谢辉.反相高效液相色谱法分析注射用氨苄西林钠有关物质[J].中国现代药物应用，2010（12）.
[2]张琳，曹晓云.氨苄西林、氨苄西林钠及注射用氨苄西林钠中二聚体及其他相关物质的HPLC检查法[J].天津药学，2008（3）.
[3]刘维华，夏淑鸿，赵娟，高建龙，武晓宏.HPLC法测定生鲜乳中氨苄西林残留的方法研究[J].饲料广角，2011（20）.
[4]徐帆，冯恩富，余昉，徐贵丽.HPLC法测定人血浆中氨苄西林含量及其药动学研究[J].中国药房，2008（14）.
[5]刘浩，杨美成，仇仕林.HPLC法同时测定注射用氨苄西林钠/氯唑西林钠的含量[J].中国抗生素杂志，2006（1）.