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为获得毒力较弱并能够区分自然感染和疫苗免疫的布鲁氏菌候选疫苗株,本研究采用PCR方法扩增布鲁氏菌疫苗株DnaK基因上下游同源臂序列及卡那基因序列,并利用融合PCR将以上基因序列融合,构建pDM18-T-△DnaK-Kana打靶载体。电转化至布鲁氏菌M5-90感受态细胞,筛选该菌疫苗株M5-90的DnaK基因缺失株,并对获得的M5-90△DnaK遗传稳定性、生长曲线、毒力和细胞免疫指标进行检测。结果表明,M5-90△DnaK与M5-90体外生长曲线相似,M5-90△DnaK在胞内的存活能力显著低于M5-90