【摘 要】
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目的 探讨非经典的Wnt通路对雌激素刺激后黑素生成相关基因的作用.方法 原代培养人表皮黑素细胞,用含不同浓度17-β雌二醇的培养基培养黑素细胞,采用CCK-8法测定黑素细胞增殖
【机 构】
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中国医学科学院北京协和医学院皮肤病研究所,江苏南京,210042
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目的 探讨非经典的Wnt通路对雌激素刺激后黑素生成相关基因的作用.方法 原代培养人表皮黑素细胞,用含不同浓度17-β雌二醇的培养基培养黑素细胞,采用CCK-8法测定黑素细胞增殖率、多巴比色法测定酪氨酸酶活性、NaOH溶解法测定黑素含量.根据结果选择合适的雌激素浓度作用于黑素细胞,实时荧光定量PCR检测作用后非经典通路相关因子mRNA的表达,蛋白印迹法检测作用前后非经典通路相关因子蛋白的表达.使用单因素的方差分析法分析各组之间的差异.结果 雌激素浓度为10-13~ 10-5mol/L时黑素细胞增殖率较对照上升(P<0.01).雌激素刺激后酪氨酸酶活性和黑素含量均较对照组升高(P<0.01).10-9mol/L雌激素作用后,WIF-1基因mRNA表达升高(P<0.01),JNK、MITF基因mRNA表达均降低(P<0.01),WNT5A,TYR基因mRNA的表达与对照组相比无统计学意义(P>0.05).10-9 mol/L雌激素作用后,WNT5A,WIF-1,TYR基因蛋白表达升高,MITF,JNK基因蛋白表达量降低.结论 非经典通路相关基因参与了雌激素对黑素细胞黑素生成的调节作用.
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