观察熊果酸对血小板衍生生长因子(PDGF)诱导的大鼠活化型肝星状细胞株(HSC–T6)还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NOX)活化及下游信号通路激活的影响。
方法取大鼠HSC–T6，分为空白对照组(不予处理)、熊果酸对照组(50 μmol/L)、PDGF组(10 μg/L)、熊果酸干预组(50 μmol/L熊果酸＋10 μg/L PDGF)、二联苯碘干预组(20 μmol/L二联苯碘＋10 μg/L PDGF)、SB203580干预组(10 μmol/L SB203580＋10 μg/LPDGF)、LY294002干预组(10 μmol/L LY294002＋10 μg/L PDGF)、活性氧阳性对照组(5 μg/mL活性氧试剂rosup)。采用荧光定量–PCR法检测除活性氧阳性对照组外的其余各组细胞中Ⅰ型胶原mRNA的表达水平。采用Western印迹法检测膜蛋白NOX亚基p47phox(除外活性氧阳性对照组)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K，除外活性氧阳性对照组和SB203580干预组)、磷酸化蛋白激酶B(p–Akt，除外活性氧阳性对照组和SB203580干预组)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(除外活性氧阳性对照组和LY294002干预组)的表达。采用活性氧检测试剂盒和荧光酶标仪检测除SB203580干预组和LY294002干预组外的其余各组细胞内荧光强度。组间比较行单因素方差分析和LSD检验。
结果Ⅰ型胶原mRNA表达水平，PDGF组(3.74±0.32)高于空白对照组(1.00±0.00)，熊果酸对照组(0.21±0.02)低于空白对照组，熊果酸干预组(1.02±0.12)、二联苯碘干预组(1.09±0.21)、SB203580干预组(1.18±0.27)、LY294002干预组(1.15±0.26)均低于PDGF组，差异均有统计学意义(t＝15.667、–4.501、–15.553、–15.154、–14.642、–14.813，P均<0.05)。p47phox蛋白表达水平，PDGF组(1.98±0.53)高于空白对照组(1.00±0.00)，熊果酸对照组(0.48±0.10)低于空白对照组，熊果酸干预组(0.95±0.26)、二联苯碘干预组(0.99±0.28)、SB203580干预组(0.93±0.31)、LY294002干预组(1.07±0.19)均低于PDGF组，差异均有统计学意义(t＝4.209、–2.234、–4.424、–4.252、–4.510、–3.909，P均<0.05)。PI3K蛋白表达水平，PDGF组(2.27±0.46)高于空白对照组(1.00±0.00)，熊果酸干预组(0.59±0.28)低于PDGF组和空白对照组，熊果酸对照组(0.14±0.07)低于空白对照组，二联苯碘干预组(0.53±0.25)、LY294002干预组(0.35±0.14)均低于PDGF组，差异均有统计学意义(t＝6.205、–8.208、–2.003、–4.202、–8.502、–9.831，P均<0.05)。p–Akt蛋白表达水平，PDGF组(2.54±0.49)高于空白对照组(1.00±0.00)，熊果酸干预组(0.74±0.20)、二联苯碘干预组(0.94±0.37)、LY294002干预组(1.17±0.41)均低于PDGF组，熊果酸对照组(0.59±0.15)低于空白对照组，差异均有统计学意义(t＝5.927、–6.928、–6.158、–5.273、–1.578，P均<0.05)。磷酸化p38MAPK蛋白表达水平，PDGF组(1.98±0.35)高于空白对照组(1.00±0.00)，熊果酸干预组(0.68±0.28)、二联苯碘干预组(0.63±0.27)、SB203580干预组(0.67±0.29)均低于PDGF组，熊果酸对照组(0.28±0.13)低于空白对照组，差异均有统计学意义(t＝4.897、–6.479、–6.727、–6.529、–3.561，P均<0.05)。活性氧水平，PDGF组(105.57±7.51)高于空白对照组(69.60±8.63)，熊果酸干预组(64.56±9.11)、二联苯碘干预组(65.75±6.62)均低于PDGF组，熊果酸对照组(29.84±3.19)低于空白对照组，差异均有统计学意义(t＝6.368、–7.288、–7.071、–7.255，P均<0.05)。
结论熊果酸或可抑制PDGF诱导的大鼠HSC–T6细胞内NOX亚基p47phox蛋白膜移位及活性氧的产生，进而阻断PI3K–蛋白激酶B、p38MAPK信号通路的磷酸化及Ⅰ型胶原mRNA的表达。