论文部分内容阅读
背景 视神经蛋白(OPTN)基因是青光眼和肌萎缩性脊髓侧索硬化的致病基因,在眼部视网膜组织中的表达最多.我们先前的研究分离出与OPTN相互作用的蛋白质,确定其中之一为视网膜色素变性的致病基因——碱性亮氨酸拉链(bZIP)转录因子,即神经视网膜亮氨酸(NRL)拉链,并证实OPTN和NRL两蛋白间存在相互作用. 目的 确定与NRL相互作用所必需的OPTN蛋白结合区域. 方法 构建一系列带FLAG标签的OPTN部分片段缺失质粒,分别与带血凝素标记的NRL(HA-NRL)共转染HeLaS3细胞.用抗HA和抗FLAG标签抗体分别对细胞质和细胞核提取物进行免疫共沉淀和Western blot检测,分析两蛋白质间的相互结合方式,以确定NRL与OPTN蛋白的结合区域.结果 在OPTN的第一、第二和第三缺失区域质粒转染细胞的细胞核组分中均检测出血凝素标记的NRL(HA-NRL)免疫共沉淀条带,但在第四缺失区域质粒中不产生此HA-NRL条带.从所有缺失质粒及全长OPTN质粒转染细胞的细胞质组分中均未观察到NRL条带.结论 本研究进一步证实OPTN和NRL在HeLaS3细胞核内的相互作用,并明确其蛋白结合区域.在共表达NRL和OPTN的HeLaS3细胞中,Flag-OPTN可与HA-NRL相互结合,且OPTN的尾端区域(423-577)是结合NRL所必需的。