【摘 要】
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源自原核生物"限制-修饰"系统的限制性内切酶是生命科学研究的重要工具酶.将小球藻Chlorella病毒NYs-1的GpC DNA甲基化酶M.CviPI导入大肠杆菌表达宿主ER2566,高效表达限制酶P
【机 构】
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淮海工学院江苏省海洋药物活性分子筛选重点实验室; 淮海工学院江苏省海洋生物产业技术协同创新中心; 武汉大学生命科学学院; 江苏省海洋资源开发研究院;
【基金项目】
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国家自然科学基金(31470275,31300652);江苏省自然科学基金(BK20130406);江苏省高校自然科学基金(13KJB180003);江苏省高校优势学科建设工程资助项目
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源自原核生物"限制-修饰"系统的限制性内切酶是生命科学研究的重要工具酶.将小球藻Chlorella病毒NYs-1的GpC DNA甲基化酶M.CviPI导入大肠杆菌表达宿主ER2566,高效表达限制酶PstⅠ的基因,再通过简便的Ni亲和、阴离子交换两步层析纯化获得重组限制酶PstⅠ.结果表明,该重组限制酶的蛋白纯度达到90%以上,比活力达到640 000U·mg-1,并具有快速酶切性能,能够在15min内完成1μg底物λDNA的消化,达到商业化限制酶PstⅠ的质量标准.
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