【摘 要】
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探讨丹酚酸B保护H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的机制是否与调控NIX介导的线粒体自噬有关.体外培养H9c2心肌细胞,分为正常组、模型组、丹酚酸B组(50 μmol· L-1),缺氧4h复氧2h
【机 构】
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中国中医科学院西苑医院基础医学研究所,北京100091中国中医科学院西苑医院基础医学研究所,北京100091;滨州医学院中西医结合学院,山东烟台264003;
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探讨丹酚酸B保护H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的机制是否与调控NIX介导的线粒体自噬有关.体外培养H9c2心肌细胞,分为正常组、模型组、丹酚酸B组(50 μmol· L-1),缺氧4h复氧2h建立缺氧/复氧损伤模型.正常组:高糖DMEM培养基培养;模型组:无糖无氧DMEM培养基培养,缺氧、复氧均不加任何药物;丹酚酸B组:缺氧同时加入用无糖DMEM培养基配制的丹酚酸B,其余过程同模型组.CCK-8法检测心肌细胞活力,微量酶标法检测心肌细胞乳酸脱氢酶(LDH)漏出量,化学荧光法检测细胞内活性氧(ROS)水平、线粒体膜电位(Δψm)变化,萤光素酶法检测细胞内三磷酸腺苷(ATP)水平,蛋白免疫印迹(Western blot)法检测自噬相关蛋白LC3-I和LC3-Ⅱ、凋亡相关蛋白cleaved caspase-3及线粒体自噬受体蛋白NIX表达.与正常组相比,模型组H9c2心肌细胞活力、ATP水平降低(P＜0.05),LDH漏出、ROS生成增多(P＜0.01),Δψm降低(P＜0.01),LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、cleaved caspase-3、NIX蛋白表达均升高(P＜0.05);与模型组相比,丹酚酸B可显著升高细胞活力、降低LDH漏出量和ROS水平(P＜0.01),升高细胞内ATP含量(P＜0.05)及Aψm(P＜0.01),降低自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值(P＜0.01),下调cleaved caspase-3和NIX蛋白表达(P＜0.05).丹酚酸B对H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用与抑制线粒体自噬发生有关,其具体机制可能为抑制NIX介导的线粒体自噬激活,从而升高Δψm,降低ROS生成,降低cleaved caspase-3和LC3-Ⅱ蛋白表达,升高细胞活力.
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