一株地黄根腐病新病原的分离与鉴定

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根腐病近年在地黄主产区普遍发生,对地黄产量及品质影响很大.该研究从地黄主产区采集的地黄根腐病样中分离到1株不同于以往报道的新病原,其在PDA培养基上菌落呈灰黑色,菌丝结构致密,气生菌丝欠发达,菌落背面呈黑色.该病菌菌丝粗细不均,直径2~3 μm,多有相互缠绕;病菌产孢结构未见,分生孢子小型,近圆形,直径约1μm.将病菌离体接种健康地黄块根,保湿培养数天后接种部位黑褐色腐烂;活体接种健康地黄根部土壤,正常培养数天后地黄苗叶片失水萎蔫,根部黑褐色腐烂,与田间症状一致.病菌基因组DNA经真菌rDNA-ITS通用引物ITS1/ITS4扩增及同源性分析,供试菌株与Heterophoma sp.,Phoma sp.,P.novae-verbascicola及P.herbarum聚为一支,核酸序列同源性为99.21% ~99.43%;经tub2基因专用引物Btub2Fd/Btub4Rd扩增及同源性分析,供试菌株与H.verbascicola,H.novae-verbascicola,H.poolensis,P.krbarum,H.sylvatica,H.verbascicola,H.verbasci-densiflori核酸序列同源性为97.00%~98.02%,与H.novae-verbascicola亲缘关系最近;经lsu基因专用引物LR0R/LR7扩增及同源性分析,供试菌株与H.novae-verbascicola聚为一支.结合形态特征观察、核酸序列比对及科赫氏法则验证结果,最终将该病菌鉴定为H.novae-verbascicola.该研究工作对后续开展地黄根腐病理论研究及根腐病田间防治具有重要意义.
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