【摘 要】
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目的 构建可表达乙型肝炎病毒(HBV)HBsAg-EGFP融合蛋白的真核表达载体;获得重组质粒稳定转染的Chang Liver细胞系.方法 利用PCR技术从HBV基因组中扩增出HBsAg基因片段,BamH I/EcoR l双酶切后连接到经同样酶切的pEGFP-N1真核表达载体,转化TG1菌株感受态细胞,获得阳性重组质粒pEGFPNl.HBsAg.将阳性克隆用脂质体法转染Chang Liver细胞,
【机 构】
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100039,北京,解放军军医进修学院,解放军第三〇二医院肝衰竭治疗研究中心,北京大学人民医院,北京大学人民医院,北京大学人民医院,北京大学人民医院
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目的 构建可表达乙型肝炎病毒(HBV)HBsAg-EGFP融合蛋白的真核表达载体;获得重组质粒稳定转染的Chang Liver细胞系.方法 利用PCR技术从HBV基因组中扩增出HBsAg基因片段,BamH I/EcoR l双酶切后连接到经同样酶切的pEGFP-N1真核表达载体,转化TG1菌株感受态细胞,获得阳性重组质粒pEGFPNl.HBsAg.将阳性克隆用脂质体法转染Chang Liver细胞,经持续G418压力选择和有限稀释法克隆化获得稳定转染的细胞系.结果 成功构建了真核表达载体pEGFPN1-HBsAg;建立了其重组质粒稳定转染的Chang Liver细胞系.结论 重组质粒稳定转染的Chang Liver细胞系可表达HBsAg-EGFP融合蛋白;该细胞系可以用于筛选HBsAg转染细胞后,差异表达的蛋白质研究,为深入研究HBsAg可能的致病机制提供依据。
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1概述 1980年由侯云德编著的"干扰素及其临床应用"一书由江苏人民科技出版社出版以来已经有27年了[1].重组人干扰素自1986年美国FDA及1989年我国SFDA批准投放市场以来也各有21年和18年了,干扰素的基础和临床研究又已取得了较大进展。
聚乙二醇α-2a干扰素作为抗病毒的主要药物之一,具有清除和抑制乙型肝炎病毒(HBV)、减轻肝脏炎症、阻止肝纤维化的发生与发展、预防肝细胞癌的发生,我科于2004年8月至2006年2月使用聚乙二醇干扰素α-2a治疗CHB25例,观察其疗效及不良反应,现报道如下。
目的 研究CD8+ T细胞对人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)表位的免疫主导应答.方法 分别采用酶联免疫斑点技术(ELISPOT)和羧乙基锗倍半氧化物(CFSE)标记流式分析技术,以覆盖HIV-1 Env、Pol、Gag、Vif、Nef、Tat区的701个重叠肽段组成的34个肽段库及其部分单肽段作为刺激表位,对一例感染HIV-1的长期不进展者(LTNP)的外周血单个核细胞(PBMC)中CD8+ T细
蜱传脑炎是经蜱叮咬而感染蜱传脑炎病毒引起的一类急性传染病.临床上以突发高热及中枢神经系统症状为主要特征,起病急,病死率高,后遗症严重[1].蜱传脑炎也是一种人畜共患病.由于蜱传脑炎病毒种类多,临床症状严重,并且由于此类疾病几乎遍布于世界各大洲,成为国际性的公共卫生问题[1]。
轮状病毒是引起儿童重症腹泻的主要病原.目前,绝大多数研究认为A组轮状病毒的VP6和NSP4基因在进化上紧密联系[1].我们曾报道过一株在世界上极为罕见的人A组轮状病毒GSP[6]毒株[2](LL3354),通过对该毒株的VP6和NSP4全基因的分析,发现LL3354的VP6和NSP4编码基因是通过独立进化而来。
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