目的：重楼在《中国药典》中记载为小毒，但其毒性机制尚未阐明。随着人们对中药安全性问题的重视，重楼的临床使用安全性及其机制也待明确，本文旨在阐明重楼提取物的肝毒性机制。方法：通过斑马鱼模式生物进行急性毒性验证，采用4dpf斑马鱼暴露于重楼提取物中，24 h后吖啶橙染色，组织病理切片证明其肝脏毒性。通过网络药理学及分子对接技术预测重楼肝毒性靶点，并采用实时聚合酶链反应（Real-time PCR，RT-PCR）验证网络预测靶点及通路。结果：实验结果表明，重楼提取物暴露处理4dpf斑马鱼24 h，吖啶橙染色重楼水提物组及醇提物组在肝脏部分均会出现黄绿色荧光点，组织病理切片显示肝细胞排列紊乱松散，出现细胞凋亡、空泡等现象，表明重楼具有肝脏毒性。网络药理学结果预测重楼肝毒性可能与细胞增殖的肉瘤基因（Ras）信号通路，能量代谢和信号转导相关的磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol-3-kinase，PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B，Akt）信号通路、 丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）信号通路、酪氨酸激酶（Janus kinase，JAK）/信号传导与转录激活因子（signal transducer and activator of transcription，STAT）信号通路相关，血管内皮生长因子A（Vascular Endothelial Growth Factor A，VEGFA）、血小板衍生生长因子受体（platelet-derived growth factor receptor，PDGFRB）、鼠双微基因2（mouse double minute 2，MDM2）、STAT3、雷帕霉素靶蛋白（Mechanistic Target of Rapamycin Kinase，MTOR）、原癌基因（MET proto-oncogene， receptor tyrosine kinase，MET）、B细胞淋巴瘤2样1（B-cell Lymphoma 2 Like 1，BCL2L1）、成纤维细胞生长因子2（Fibroblast Growth Factor 2，FGF2）、白细胞介素2（Interleukin 2，IL2）及MAPK14可能是重楼造成肝毒性核心靶点，RT-PCR实验结果验证了以上推测。结论：重楼可能影响肝细胞增殖，能量代谢等通路的信号传导，从而引起肝毒性。