【摘 要】
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MEQ基因是马立克氏病病毒(MOV)血清1型特异性基因,为了研究MEQ基因的致瘤机理,本研究构建了MEQ基因的真核表达载体.首先采用TA克隆将MEQ基因片段连接pMD19-T,构建成pMD19-T-m
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MEQ基因是马立克氏病病毒(MOV)血清1型特异性基因,为了研究MEQ基因的致瘤机理,本研究构建了MEQ基因的真核表达载体.首先采用TA克隆将MEQ基因片段连接pMD19-T,构建成pMD19-T-meq,然后采用EcoR Ⅰ、Xho Ⅰ限制性内切酶双酶切将MEQ基因克隆至pVAX-1真核表达质粒,构建pVAX-1-meq真核表达质粒.提取pVAX-1-meq质粒转染至鸡胚成纤维细胞中,转染后提取贴壁细胞中总RNA,以β-actin作为内参采用Real-time PCR检测MEQ基因、错配修复相关基因、p53基因的mRNA表达情况.结果成功构建出pVAX1-meq真核表达载体,并在鸡胚成纤维细胞中成功表达.MEQ基因转染的鸡胚成纤维细胞中错配修复相关基因(MSH2和MLH1基因)、p53基因的mRNA表达量显著上调.表明MDV感染造成宿主DNA损伤后,MEQ基因影响DNA损伤修复相关基因的表达,干扰宿主对损伤的DNA进行修复,导致肿瘤的形成.
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