【摘 要】
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Gateway技术是一种非常便捷的载体构建方法,但目前构建入门克隆的方法成本较高,且存在一定的局限性.利用限制酶Eco RⅠ对pCR8-AtS5H入门克隆进行单酶切,获得入门载体pCR8片段
【机 构】
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浙江师范大学化学与生命科学学院植物遗传发育研究所
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(31470370,31670277),浙江省公益技术应用研究计划项目(2015C32043)
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Gateway技术是一种非常便捷的载体构建方法,但目前构建入门克隆的方法成本较高,且存在一定的局限性.利用限制酶Eco RⅠ对pCR8-AtS5H入门克隆进行单酶切,获得入门载体pCR8片段,然后利用不依赖序列和连接的一步克隆方法(one-step sequence-and ligation-independent cloning,One-SLIC)将纯化后水稻异分支酸合成酶基因的启动子(ICS1 pro)片段连接至pCR8入门载体,并通过菌落PCR和测序方法鉴定得到阳性入门克隆,最后通过LR重组反应将I
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