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【摘 要】 目的：用高效液相色谱法测定止痒洗剂中盐酸小檗碱含量。方法：采用Hedera C18柱（250×4.6 mm，5μm），以乙腈-0.1%磷酸溶液（50∶50，每100ml加十二烷基磺酸钠 0.1g）为流动相，流速为1.0ml·min-1，检测波长265nm。结果：盐酸小檗碱的检测浓度在3.8125～122.0μg·ml-1范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系（r=0.9999），平均加样回收率为100.70%，RSD=0.85%（n=6）。结论：HPLC法简便易行，结果准确，重现性好，可用于测定止痒洗剂中盐酸小檗碱含量。
【关键词】 止痒洗剂；高效液相色谱法；盐酸小檗碱
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2015）22-0025-02
止痒洗剂由黄柏、蛇床子、苍术、枯矾等药组成，具有清热燥湿、杀虫止痒的功能，主治湿疮、疥癣等瘙痒性皮肤病。黄柏为方中主药，盐酸小檗碱为其所含的主要活性成分之一，其含量测定法中高效液相色谱法报道较多，较为稳定，快捷。为保证药品质量，本实验采用高效液相色谱法测定止痒洗剂中盐酸小檗碱的含量。
1 仪器与试药
1.1 仪器 Agilent1100高效液相色谱仪：G1322A脱气机，G1311A四元泵，G1316A柱温箱，G1314A VWD检测器，Agilent ChemStation（美国安捷伦公司）；1/10万电子分析天平（BP-211D型，德国Sartorius）；KQ-1000E型医用超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；101-1A型电热鼓风干燥箱（南通沪通制药机械设备厂）；HH-4数显型恒温水浴锅（江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司）。
1.2 试药 盐酸小檗碱对照品（批号110713-200208，供含量测定用），购自中国药品生物制品检定所；止痒洗剂（批号120115、120227、120302），江苏省中医院制剂部生产；高效液相色谱所用试剂为色谱纯；水为超纯水；其它试剂为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件[1] 色谱柱：Hedera C18柱（250×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（50∶50，每100ml加十二烷基磺酸钠0.1g）；检测波长：265nm；柱温：30℃；流速：1.0ml·min-1；进样量10μl。
2.2 溶液制备
2.2.1 对照品溶液的制备 取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加甲醇溶解制成每1ml含244μg的溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备 精密吸取止痒洗剂样品2ml，置50ml容量瓶中，加甲醇适量，超声20min，再加甲醇定容至刻度，摇匀，微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
2.2.3 阴性对照品溶液的制备 按照止痒洗剂的制备工艺制备缺黄柏的阴性样品，按“2.2.2”的制備方法制成阴性对照品溶液。
2.3 系统适应性试验 取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液，在上述色谱条件下分别进样10 μl，记录色谱图。由色谱图可知，供试品溶液色谱中，在与盐酸小檗碱对照品色谱峰相应位置上有相应峰，而阴性对照品溶液色谱中无此峰，说明阴性对照品无干扰。在此条件下，盐酸小檗碱峰与样品中其它组分色谱峰可达基线分离，分离度大于1.5；理论板数按盐酸小檗碱峰计算，应小低于5000。见图1。
2.4 线性关系考察 取上述对照品溶液，用甲醇分别稀释至122.0、61.0、30.5、15.25、7.625、3.8125μg·ml-1，分别精密吸取各不同浓度的对照品溶液10μl，注入高效液相色谱仪中测定。经线性回归，得盐酸小檗碱回归方程y=45.65x﹢4.4244，r=0.9999，盐酸小檗碱在3.8125～122.0μg·ml-1范围内，与峰面积的积分值呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验 取同一对照品溶液，精密吸取10 μl，注入高效液相色谱仪，重复测定6次，以峰面积计算，RSD为0.48%（n=6）。试验结果表明，仪器精密度良好。
2.6 重复性试验 精密吸取同一个批号的止痒洗剂样品（120115）2ml，共6份，依法制备供试品溶液，测定，以盐酸小檗碱含量计算，RSD为0.73%（n=6）。结果表明，重复性较好。
2.7 稳定性试验 取同一供试品溶液，按上述色谱条件，于0、2、4、6、8、12 h分别进样，测定色谱峰面积，RSD为0.71%（n=6），说明供试品溶液在12h内稳定。
2.8 加样回收率试验 按加样回收率试验要求，精密称取已知含量的止痒洗剂样品（批号120115）6份，分别加入盐酸小檗碱对照品，依法制备供试品溶液，精密吸取10μl，注入高效液相色谱仪，测定，计算，平均回收率为100.70%，RSD为0.85%。见表1。
2.9 样品含量测定 取3个批号止痒洗剂样品，每批两份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，进样，测定，计算结果见表2。
3 讨论
3.1 流动相的选择 本试验曾先后参考药典[1]和文献[2-3]所用流动相测定样品中的盐酸小檗碱含量，结果采用药典流动相系统分离效果最佳，保留时间适度。因此，确定其为本法的流动相。
3.2 样品超声时间的选择 在本实验中对样品超声时间 10、20、30、40min进行了考察，测定结果显示，超声处理20、30、40min盐酸小檗碱含量接近，超声10min含量低，故选择超声时间为20min。
3.3 HPLC法测定 HPLC法测定止痒洗剂中盐酸小檗碱含量简便易行，结果准确，重现性好，可用于该制剂的质量控制。
参考文献
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010：286.
[2]马永贵，谢委，方建国，等.高效液相色谱法测定洁泽洗液中盐酸小檗碱含量[J].医药导报，2011，30（11）：1484-1486.
[3]吴晓明，金胜先，徐衡.泌感片的薄层鉴别和盐酸小檗碱的含量测定[J].安徽医药， 2009，13（5）：504-506.
（收稿日期：2015.10.12）
【关键词】 止痒洗剂；高效液相色谱法；盐酸小檗碱
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2015）22-0025-02
止痒洗剂由黄柏、蛇床子、苍术、枯矾等药组成，具有清热燥湿、杀虫止痒的功能，主治湿疮、疥癣等瘙痒性皮肤病。黄柏为方中主药，盐酸小檗碱为其所含的主要活性成分之一，其含量测定法中高效液相色谱法报道较多，较为稳定，快捷。为保证药品质量，本实验采用高效液相色谱法测定止痒洗剂中盐酸小檗碱的含量。
1 仪器与试药
1.1 仪器 Agilent1100高效液相色谱仪：G1322A脱气机，G1311A四元泵，G1316A柱温箱，G1314A VWD检测器，Agilent ChemStation（美国安捷伦公司）；1/10万电子分析天平（BP-211D型，德国Sartorius）；KQ-1000E型医用超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；101-1A型电热鼓风干燥箱（南通沪通制药机械设备厂）；HH-4数显型恒温水浴锅（江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司）。
1.2 试药 盐酸小檗碱对照品（批号110713-200208，供含量测定用），购自中国药品生物制品检定所；止痒洗剂（批号120115、120227、120302），江苏省中医院制剂部生产；高效液相色谱所用试剂为色谱纯；水为超纯水；其它试剂为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件[1] 色谱柱：Hedera C18柱（250×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（50∶50，每100ml加十二烷基磺酸钠0.1g）；检测波长：265nm；柱温：30℃；流速：1.0ml·min-1；进样量10μl。
2.2 溶液制备
2.2.1 对照品溶液的制备 取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加甲醇溶解制成每1ml含244μg的溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备 精密吸取止痒洗剂样品2ml，置50ml容量瓶中，加甲醇适量，超声20min，再加甲醇定容至刻度，摇匀，微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
2.2.3 阴性对照品溶液的制备 按照止痒洗剂的制备工艺制备缺黄柏的阴性样品，按“2.2.2”的制備方法制成阴性对照品溶液。
2.3 系统适应性试验 取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液，在上述色谱条件下分别进样10 μl，记录色谱图。由色谱图可知，供试品溶液色谱中，在与盐酸小檗碱对照品色谱峰相应位置上有相应峰，而阴性对照品溶液色谱中无此峰，说明阴性对照品无干扰。在此条件下，盐酸小檗碱峰与样品中其它组分色谱峰可达基线分离，分离度大于1.5；理论板数按盐酸小檗碱峰计算，应小低于5000。见图1。
2.4 线性关系考察 取上述对照品溶液，用甲醇分别稀释至122.0、61.0、30.5、15.25、7.625、3.8125μg·ml-1，分别精密吸取各不同浓度的对照品溶液10μl，注入高效液相色谱仪中测定。经线性回归，得盐酸小檗碱回归方程y=45.65x﹢4.4244，r=0.9999，盐酸小檗碱在3.8125～122.0μg·ml-1范围内，与峰面积的积分值呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验 取同一对照品溶液，精密吸取10 μl，注入高效液相色谱仪，重复测定6次，以峰面积计算，RSD为0.48%（n=6）。试验结果表明，仪器精密度良好。
2.6 重复性试验 精密吸取同一个批号的止痒洗剂样品（120115）2ml，共6份，依法制备供试品溶液，测定，以盐酸小檗碱含量计算，RSD为0.73%（n=6）。结果表明，重复性较好。
2.7 稳定性试验 取同一供试品溶液，按上述色谱条件，于0、2、4、6、8、12 h分别进样，测定色谱峰面积，RSD为0.71%（n=6），说明供试品溶液在12h内稳定。
2.8 加样回收率试验 按加样回收率试验要求，精密称取已知含量的止痒洗剂样品（批号120115）6份，分别加入盐酸小檗碱对照品，依法制备供试品溶液，精密吸取10μl，注入高效液相色谱仪，测定，计算，平均回收率为100.70%，RSD为0.85%。见表1。
2.9 样品含量测定 取3个批号止痒洗剂样品，每批两份，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，进样，测定，计算结果见表2。
3 讨论
3.1 流动相的选择 本试验曾先后参考药典[1]和文献[2-3]所用流动相测定样品中的盐酸小檗碱含量，结果采用药典流动相系统分离效果最佳，保留时间适度。因此，确定其为本法的流动相。
3.2 样品超声时间的选择 在本实验中对样品超声时间 10、20、30、40min进行了考察，测定结果显示，超声处理20、30、40min盐酸小檗碱含量接近，超声10min含量低，故选择超声时间为20min。
3.3 HPLC法测定 HPLC法测定止痒洗剂中盐酸小檗碱含量简便易行，结果准确，重现性好，可用于该制剂的质量控制。
参考文献
[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010：286.
[2]马永贵，谢委，方建国，等.高效液相色谱法测定洁泽洗液中盐酸小檗碱含量[J].医药导报，2011，30（11）：1484-1486.
[3]吴晓明，金胜先，徐衡.泌感片的薄层鉴别和盐酸小檗碱的含量测定[J].安徽医药， 2009，13（5）：504-506.
（收稿日期：2015.10.12）