研究miRNA-182在肝细胞癌细胞系及组织中的表达，验证miRNA-182与叉头框转录因子2(FOXF2)的靶向调控关系，并探究miRNA-182是否通过靶向调控FOXF2促进肝细胞癌的侵袭转移和血管形成。
方法收集郑州大学附属肿瘤医院2017年1月至10月入院行手术切除的原发性肝细胞癌患者41例。实时荧光定量PCR检测miRNA-182在癌组织和癌旁组织中的表达。Transwell小室转移实验和Boyden侵袭实验检测过表达miRNA-182和FOXF2对肝细胞癌侵袭转移能力的影响。体外血管形成实验检测miRNA-182和FOXF2对肝细胞癌血管形成能力的影响。双荧光素酶报告基因验证miRNA-182与FOXF2的靶向调控关系。实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测转染miRNA-182和miRNA-182 scramble后FOXF2的mRNA和蛋白质表达。统计学分析采用t检验。
结果肝细胞癌组织中miRNA-182的表达高于癌旁组织(5.41±1.72比1.80±0.76)，差异有统计学意义(t＝－5.764，P<0.01)。Transwell小室转移实验和Boyden侵袭实验结果显示，miRNA-182过表达组穿过小室底膜的细胞数较miRNA-182 scramble组增多(85.65±4.86比31.43±2.41，55.34±5.66比19.13±2.12)，而过表达miRNA-182＋FOXF2组穿过小室底膜的细胞数低于单纯过表达miRNA-182组(11.21±3.16比31.43±2.41，8.67±2.83比19.13±2.12)，差异均有统计学意义(t＝15.110、9.220、5.443、4.410，P均<0.05)。野生型FOXF2与miRNA-182共转染组荧光素酶的活性低于miRNA-182 scramble组(0.43±0.10比0.97±0.05)，差异有统计学意义(t＝8.042，P＝0.012)，而突变型FOXF2与miRNA-182共转染组和miRNA-182 scramble组荧光素酶活性强度比较(0.97±0.47比1.06±0.52)差异无统计学意义(t＝0.934，P＝0.402)。体外血管形成实验显示，miRNA-182过表达组成管数高于miRNA-182 scramble组(14.27±1.77比5.91±1.42)，且同时转染FOXF2过表达质粒后，成管能力得到恢复(1.78±0.71比14.27±1.77)，差异均有统计学意义(t＝6.530、4.570，P均<0.05)。蛋白质印迹法结果显示，miRNA-182转染组FOXF2表达水平低于miRNA-182 scramble组(1.01±0.13比4.32±0.46)，差异有统计学意义(t＝7.420，P＝0.012)。实时荧光定量PCR结果显示，miRNA-182转染组FOXF2 mRNA表达水平低于miRNA-182 scramble组(0.591±0.284比1.534±0.345)，差异有统计学意义(t＝3.465，P＝0.014)。
结论miRNA-182可通过靶向调控FOXF2促进肝细胞癌细胞的侵袭转移。