小鼠是眼科基因治疗、干细胞移植和眼底病研究的常用动物模型，视网膜下腔注射是上述研究中常用的实验技术，该技术的操作流程对研究的结果产生较大影响，但是目前对具体的视网膜下腔注射操作方法的介绍鲜见报道。
目的观察小鼠经角膜视网膜下腔注射对视网膜形态和功能的影响。
方法2月龄SPF级C57BL/6J小鼠充分扩瞳后，在眼科专用手术显微镜下用301/2G一次性注射针头在角巩膜缘内侧穿刺小鼠右眼角膜，用带有33G平针头的微量进样器沿穿刺口进入并绕过晶状体后到达玻璃体，然后逐渐进针至视网膜下腔隙，缓慢推注1 μl质量分数0.1%荧光素钠生理盐水注射液。根据注射后注射液在视网膜下腔的分布范围不同将实验眼分为80%～100%范围组和50%～70%范围组，模拟操作组以相同的方向进针至视网膜下腔但不注射溶液，小鼠的对侧眼(右眼)作为正常对照组，每组4只眼。分别于注射后1、2、3 d及注射后5周光学相干断层扫描(OCT)法观察各组小鼠视网膜的形态结构变化；于注射后5周时记录各组小鼠的视网膜电图(ERG)，然后制备小鼠视网膜石蜡切片，采用苏木精－伊红染色观察各组小鼠视网膜的组织病理学改变。
结果注射眼注射后视网膜绿色荧光范围>50%且无明显并发症者为注射成功，成功率>70%。OCT观察显示，注射后1 d可见注射区域视网膜神经层与视网膜色素上皮(RPE)层脱离，局部视网膜隆起，注射后2 d注射区域视网膜复位。注射后5周，模拟操作组、50%～70%范围组、80%～100%范围组和正常对照组小鼠ERG b波振幅分别为(386.25±37.88)、(357.50±41.03)、(324.25±53.45)和(410.50±14.88)μV，4个组间总体比较差异有统计学意义(F＝3.574，P＝0.047)，正常对照组ERG b波振幅明显高于80%～100%范围组(均P<0.05)。组织病理学检查显示，模拟操作组、50%～70%范围组和80%～100%范围组小鼠神经层与RPE层分离，视网膜外核层细胞增生和移位，其中50%～70%范围组和80%～100%范围组小鼠注射点周围区域视细胞外节排列紊乱。各组小鼠未注射区域视网膜各层结构均正常。
结论经角膜视网膜下腔注射法是一种安全、可行的操作方法。