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摘要:本文用H-E整块染色切片法与石蜡切片H-E染色法比较,分析各自存在的优缺点。作者认为在制作批量生产的教学切片,H-E整块切片法更为优越。
关键词:组织学 切片制作 H-E整块染色
当前,可以把医学的研究方法归纳为形态、生理和生化三种基本方法,以及三者之间的边缘学科(如组织化学、免疫组织化学等)。就目前的水平来说,虽然分子生物学、免疫学、遗传工程学、生物化学等科研方法有了飞跃发展。但是,形态学的研究仍然是一个最基本的重要方法。因此,组织学制片技术已相当广泛地应用于众多的学科领域。
组织学是研究机体微细结构及相关功能的学科。组织学的发展是与组织学技术分不开的。组织学技术种类繁多,但石蜡切片、H-E染色法仍是经典而常用的技术。无论在教学与科研工作中,机体微细结构的观察,都要借助光学显微镜来观察切片。所以,此技术是医学及生物学领域的主要研究手段。
在组织学技术操作中,有关石蜡切片、H-E染色法介绍较多,但H-E整块染色切片法少有报道。作者多年来均坚持上述两种方法制作教学切片。
一、H-E整块染色切片法与石蜡切片H-E染色法的技术流程
(一)H-E整块染色法
取材→固定→脱色→媒染→苏木精染色→分色→还原→流水冲洗→蒸馏水换洗→伊红染色→常规脱水→透明→石蜡包埋、切片→贴片及烤片→封固。
(二)石蜡切片H-E染色法
取材→固定→脱水→透明→浸蜡→包埋→切片→染色→封固。
二、H-E整块染色切片法的优点
(一)制出的教学切片成功率高
无论取自动物或人的组织器官,由于组成成分及结构特点不同,用石蜡切片后的H-E染色,如皮肤、坐骨神经,较难掌握脱水、透明及浸蜡时间,难切成连片,失败机会较多,特别是初学者。但用H-E整块染色法制片,则大多能获得满意的连续蜡片。
(二)一个成功的H-E整块染色法,能切较多的统一规格的教学切片
如H-E染色的组织块,样片镜检后可立即了解切片质量的优劣?如符合教学要求,立即将蜡块一次性全部切成蜡片、贴片。一个猴的脑垂体可获得350—400张教学切片;如用传统的石蜡切片、H-E染色法,在样片染色镜检合格后,蜡块重新上切片机,再修组织块,浪费材料较多。同样,一个猴脑垂体用此方法制片,却只能切200—250张教学切片。因此从经济效益来看,H-E整块染色法所制教学切片成本较低。
(三)后续制片过程简便
如镜检已合格的H-E整块染色法切片,切片后贴片,经二甲苯脱蜡即可封片。如处理较好的这种蜡块,切下的每张切片无论从肉眼观察及镜检:结构、外形染色均一致。
(四)染色不理想的弥补
如切片染色较浅,可分别进行苏木精及伊红复染:如染色过深,可分别在盐酸酒精脱色苏木精;在70%酒精脱色伊红,至满意为止。
三、H-E整块染色法的局限性
(一)不适于病理检验及科研组织;
(二)如染色时间掌握不好,常造成组织结构周边染色深,中央染色浅,影响教学效果;
(三)制片全过程所需时间较长约15—20天。对急需补充的教学切片,此法不合适。
四、体会
无论哪种制片方法,都要求我们具备:
(一) 严肃的科学态度、严谨的工作作风
由于制片过程工作程序的连续性,制片过程中我们常常放弃休息时间,严格按流程进行操作。
(二) 对工作环境的正确态度
实验室工作除了工作的连续性,工作常超出8小时外,制片中所用的有害化学试剂如:福尔马林及二甲苯等。长期接触,是对经历了孕期及哺乳期的女同志的考验。这要求我们必须有忠诚人民教育事业的高度事业心和责任感的正确态度来对待。
(三)团结协作的团队精神
实验室工作的性质,从切片取材开始的多个环节,不可能一个人独立完成,需要分工合作。因此,团结协作的团队精神尤为重要。
(四)甘当“绿叶”衬“红花”的奉献精神
实验室工作的性质决定了这支队伍较少面对学生,主要是默默无闻的在实验室工作,但要制出高质量的教学切片配合教学,对培养高质量的本科学生及研究生、开发学生智能起着主要的作用。因此实验室绝非单纯制作切片的生产“车间”或教学中的“后勤部”,而是进行教学和科研的重要基地。这支队伍必须认识和热爱自己的本职工作。
因此,实验室水平的高低,不仅体现在先进的设备条件更体现在实验室人员的素质和技术队伍的技术水平。对于两种制片方法,各有其优缺点。如制作大批教学切片我们认为H-E整块染色法较好,但对科研及病理检验的切片,仍需采用传统石蜡切片后染色为宜。因此,对于一个从事组织学专业人员不能只掌握一种制片方法,既要会整块染色法也要会石蜡切片染色法。这均是本专业师培工作中应该掌握的基本技能,这样才能适应于教学及科研工作的需要。
参考文献:
[1] 刘介眉、严庆汉、路英杰,《病理组织染色的理论方法和应用》,人民卫生出版社
[2] 胡登焜、杨森、刘志勋,《组织学特殊染色技术实践》,陕西师范大学出版社
[3] 邹仲之、李继承,《组织学与胚胎学》(第7版),人民卫生出版社
[4] 熊续畲,《组织学标本制作技术》,湖北医学院
[5] 陈诗芸、袁柱,《我们是如何组织实验室工作的》,云南省高校实验室研究
关键词:组织学 切片制作 H-E整块染色
当前,可以把医学的研究方法归纳为形态、生理和生化三种基本方法,以及三者之间的边缘学科(如组织化学、免疫组织化学等)。就目前的水平来说,虽然分子生物学、免疫学、遗传工程学、生物化学等科研方法有了飞跃发展。但是,形态学的研究仍然是一个最基本的重要方法。因此,组织学制片技术已相当广泛地应用于众多的学科领域。
组织学是研究机体微细结构及相关功能的学科。组织学的发展是与组织学技术分不开的。组织学技术种类繁多,但石蜡切片、H-E染色法仍是经典而常用的技术。无论在教学与科研工作中,机体微细结构的观察,都要借助光学显微镜来观察切片。所以,此技术是医学及生物学领域的主要研究手段。
在组织学技术操作中,有关石蜡切片、H-E染色法介绍较多,但H-E整块染色切片法少有报道。作者多年来均坚持上述两种方法制作教学切片。
一、H-E整块染色切片法与石蜡切片H-E染色法的技术流程
(一)H-E整块染色法
取材→固定→脱色→媒染→苏木精染色→分色→还原→流水冲洗→蒸馏水换洗→伊红染色→常规脱水→透明→石蜡包埋、切片→贴片及烤片→封固。
(二)石蜡切片H-E染色法
取材→固定→脱水→透明→浸蜡→包埋→切片→染色→封固。
二、H-E整块染色切片法的优点
(一)制出的教学切片成功率高
无论取自动物或人的组织器官,由于组成成分及结构特点不同,用石蜡切片后的H-E染色,如皮肤、坐骨神经,较难掌握脱水、透明及浸蜡时间,难切成连片,失败机会较多,特别是初学者。但用H-E整块染色法制片,则大多能获得满意的连续蜡片。
(二)一个成功的H-E整块染色法,能切较多的统一规格的教学切片
如H-E染色的组织块,样片镜检后可立即了解切片质量的优劣?如符合教学要求,立即将蜡块一次性全部切成蜡片、贴片。一个猴的脑垂体可获得350—400张教学切片;如用传统的石蜡切片、H-E染色法,在样片染色镜检合格后,蜡块重新上切片机,再修组织块,浪费材料较多。同样,一个猴脑垂体用此方法制片,却只能切200—250张教学切片。因此从经济效益来看,H-E整块染色法所制教学切片成本较低。
(三)后续制片过程简便
如镜检已合格的H-E整块染色法切片,切片后贴片,经二甲苯脱蜡即可封片。如处理较好的这种蜡块,切下的每张切片无论从肉眼观察及镜检:结构、外形染色均一致。
(四)染色不理想的弥补
如切片染色较浅,可分别进行苏木精及伊红复染:如染色过深,可分别在盐酸酒精脱色苏木精;在70%酒精脱色伊红,至满意为止。
三、H-E整块染色法的局限性
(一)不适于病理检验及科研组织;
(二)如染色时间掌握不好,常造成组织结构周边染色深,中央染色浅,影响教学效果;
(三)制片全过程所需时间较长约15—20天。对急需补充的教学切片,此法不合适。
四、体会
无论哪种制片方法,都要求我们具备:
(一) 严肃的科学态度、严谨的工作作风
由于制片过程工作程序的连续性,制片过程中我们常常放弃休息时间,严格按流程进行操作。
(二) 对工作环境的正确态度
实验室工作除了工作的连续性,工作常超出8小时外,制片中所用的有害化学试剂如:福尔马林及二甲苯等。长期接触,是对经历了孕期及哺乳期的女同志的考验。这要求我们必须有忠诚人民教育事业的高度事业心和责任感的正确态度来对待。
(三)团结协作的团队精神
实验室工作的性质,从切片取材开始的多个环节,不可能一个人独立完成,需要分工合作。因此,团结协作的团队精神尤为重要。
(四)甘当“绿叶”衬“红花”的奉献精神
实验室工作的性质决定了这支队伍较少面对学生,主要是默默无闻的在实验室工作,但要制出高质量的教学切片配合教学,对培养高质量的本科学生及研究生、开发学生智能起着主要的作用。因此实验室绝非单纯制作切片的生产“车间”或教学中的“后勤部”,而是进行教学和科研的重要基地。这支队伍必须认识和热爱自己的本职工作。
因此,实验室水平的高低,不仅体现在先进的设备条件更体现在实验室人员的素质和技术队伍的技术水平。对于两种制片方法,各有其优缺点。如制作大批教学切片我们认为H-E整块染色法较好,但对科研及病理检验的切片,仍需采用传统石蜡切片后染色为宜。因此,对于一个从事组织学专业人员不能只掌握一种制片方法,既要会整块染色法也要会石蜡切片染色法。这均是本专业师培工作中应该掌握的基本技能,这样才能适应于教学及科研工作的需要。
参考文献:
[1] 刘介眉、严庆汉、路英杰,《病理组织染色的理论方法和应用》,人民卫生出版社
[2] 胡登焜、杨森、刘志勋,《组织学特殊染色技术实践》,陕西师范大学出版社
[3] 邹仲之、李继承,《组织学与胚胎学》(第7版),人民卫生出版社
[4] 熊续畲,《组织学标本制作技术》,湖北医学院
[5] 陈诗芸、袁柱,《我们是如何组织实验室工作的》,云南省高校实验室研究