【摘 要】
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为构建抗鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的细菌展示单链抗体(scFv)库并筛选出具有高亲和力和中和活性的scFv.本研究从IBDV免疫鸡的法氏囊提取总RNA,采用RT-PCR的方法分别扩增鸡
【机 构】
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东北农业大学生命科学学院/生物制药教研室,黑龙江哈尔滨,150030中国科学院大学生命科学学院,北京,100049;国家知识产权局专利局专利审查协作北京中心,北京,100083;中国水产科学研究院黑龙
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为构建抗鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的细菌展示单链抗体(scFv)库并筛选出具有高亲和力和中和活性的scFv.本研究从IBDV免疫鸡的法氏囊提取总RNA,采用RT-PCR的方法分别扩增鸡抗体的VH和VL编码序列,插入含有(Gly4Ser)3 linker的pTlinker载体中,再将VH-linker-VL片段亚克隆到细菌展示载体pBSD中.以FITC标记的VP2蛋白为诱饵,通过流式细胞术筛选出5株阳性scFv,其氨基酸同源性为82.16 ％～87.27％.将5株scFv基因分别插入原核表达载体pET-27b(+)中,构建重组表达质粒pET-IBDV-scFv.将其转化大肠杆菌Rosetta进行诱导和表达,该5株scFv相对分子质量均约为28 ku.此外,利用纯化的scFv包被于ELISA检测板中作为扑捉抗体,检测结果显示scFv对VP2蛋白和不同IBDV株均具有特异性结合能力.而且通过体外中和试验结果表明,仅有一株scFv具有病毒中和活性,可以有效阻断IBDV(B87株)对鸡胚成纤维细胞(DFl)的感染.该研究结果为进一步研制IBDV治疗性抗体奠定了基础.
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