【摘 要】
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将来源于Clostridium bolteae ATCCBAA-613的DAEase基因序列经密码子优化合成，以pCold TF为表达载体，冷休克启动子CspA低温诱导DAEase基因在大肠杆菌（Escherichia coli）BL21 （DE3）中表达，得到高效可溶性的重组Cb-DAEase并利用镍柱亲和层析分离纯化。结果表明，Cb-DAEase最适pH和温度为7.0和55℃，Co2+能够显著
【基金项目】
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广西自然科学基金资助项目（2020GXNSFAA297104）； 崇左市科技计划项目（崇科FA2020001）；
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将来源于Clostridium bolteae ATCCBAA-613的DAEase基因序列经密码子优化合成，以pCold TF为表达载体，冷休克启动子CspA低温诱导DAEase基因在大肠杆菌（Escherichia coli）BL21 （DE3）中表达，得到高效可溶性的重组Cb-DAEase并利用镍柱亲和层析分离纯化。结果表明，Cb-DAEase最适pH和温度为7.0和55℃，Co2+能够显著（P＜0.05）增强酶活力。对培养条件进行优化得到，在7 g/L甘油、10 g/L酵母膏、1%接种量、0.25 mmol/L IPTG、诱导前培养5 h的条件下，Cb-DAEase活力达到（10.11±0.02）U/g，比优化前（1.38±0.01） U/g提高了7.33倍；以120 g/L的D-果糖为底物全细胞催化0.5 h后，D-阿洛酮糖产量为（11.47±0.04）g/L，比优化前（1.03±0.02）g/L提高了11.14倍。基于冷休克表达策略构建的重组菌经发酵优化后Cb-DAEase活力显著（P＜0.05）提高，为高效制备D-阿洛酮糖提供了理论支持。
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