【摘 要】
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以筛选得到的Morganella morganiiJ-8细菌的基因组为模板,通过PCR扩增得到目的基因mdlh2。核苷酸序列测定结果表明,基因全长1 046 bp。以pET28a(+)为表达载体,构建重组质粒pE
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(30770054);国家高技术研究发展计划(863计划)资助项目(2007AA100402)
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以筛选得到的Morganella morganiiJ-8细菌的基因组为模板,通过PCR扩增得到目的基因mdlh2。核苷酸序列测定结果表明,基因全长1 046 bp。以pET28a(+)为表达载体,构建重组质粒pET28a(+)-mldh2,并在E.coliBL21(DE3)中表达。利用表达产物进行生物转化,发现其具有催化底物1-苯基-2-甲氨基丙酮(简称MAK)产l-麻黄碱的活力。进一步考察了诱导时间和IPTG浓度对重组菌表达的羰基还原酶的影响,37℃下用0.5 mmol/L的IPTG诱导4 h,重组羰基还原酶的酶活达到0.2 U/mg蛋白,转化液中l-麻黄碱质量浓度达到45 mg/L。
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