探讨天然来源的活性化合物芹菜素对脂多糖(LPS)诱导的大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的影响及其机制。
方法以原代培养的Sprague Dawley大鼠的主动脉VSMC为研究对象。分别检测芹菜素对VSMC的细胞毒性(根据加入芹菜素的浓度将细胞分为5组,即空白对照组以及芹菜素10、20、40和80 μmol/L组,采用CCK-8试剂盒检测VSMC的活性)、LPS对VSMC增殖的影响(根据加入LPS的不同浓度将细胞分为5组,即空白对照组以及LPS 0.1、1、10和100 μg/ml组,采用CCK-8法检测细胞增殖情况)、芹菜素对LPS诱导的VSMC增殖的影响(实验分为5组,即空白对照组、LPS组、LPS+芹菜素10 μmol/L组、LPS+芹菜素20 μmol/L组和LPS+芹菜素40 μmol/L组,采用CCK-8法检测细胞增殖情况;实验分为3组,即LPS组、LPS+芹菜素组和空白对照组,采用EdU法检测细胞增殖情况)以及不同干预组VSMC细胞周期的分布情况(实验分为3组,即LPS组、LPS+芹菜素组和空白对照组,采用流式细胞仪进行检测)。
结果(1)芹菜素细胞毒性的检测结果:芹菜素10、20和40 μmol/L组VSMC的活力与空白对照组比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。芹菜素80 μmol/L组VSMC活力为57%,显著低于空白对照组(P<0.05)。(2)不同浓度LPS对VSMC增殖的影响:LPS 0.1、1和10 μg/ml组VSMC增殖率均明显高于空白对照组(P分别<0.05、0.01和0.01),其中以LPS 10 μg/ml组VSMC增殖率为最高。LPS 100 μg/ml组VSMC增殖率则明显低于空白对照组(P<0.05)。(3)芹菜素对LPS诱导的VSMC增殖影响的CCK-8法检测结果:LPS+芹菜素10 μmol/L组VSMC增殖率与LPS组比较差异无统计学意义(P均>0.05),LPS+芹菜素20 μmol/L组和LPS+芹菜素40 μmol/L组VSMC增殖率则均明显低于LPS组(P均<0.05)。(4)芹菜素对LPS诱导的VSMC增殖影响的EdU法检测结果:LPS组VSMC EdU结合率明显高于空白对照组(P<0.01),LPS+芹菜素组VSMC EdU结合率则明显低于LPS组(P<0.01)。(5)芹菜素对LPS诱导的VSMC细胞周期影响的检测结果:LPS组VSMC分布于G0/G1期的百分率明显低于空白对照组(P<0.05),分布于S期的百分率则明显高于空白对照组(P<0.05)。LPS+芹菜素组VSMC分布于G0/G1期的百分率明显高于LPS组,分布于S期的百分率则明显低于LPS组。
结论芹菜素具有抑制LPS诱导的大鼠主动脉VSMC增殖的作用,而抑制细胞有丝分裂,使其停滞于G0/G1期可能是这一作用的机制之一。