【摘 要】
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目的 研究骨化三醇 (Calcitriol) 对H2 O2诱导的间充质干细胞氧化应激和成骨损伤的预防作用及其机制.方法 使用H2 O2处理细胞, CCK8法检测细胞存活率, 通过ALP活性检测H2 O2
【机 构】
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上海交通大学医学院附属新华医院老年医学科 上海市, 200092
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目的 研究骨化三醇 (Calcitriol) 对H2 O2诱导的间充质干细胞氧化应激和成骨损伤的预防作用及其机制.方法 使用H2 O2处理细胞, CCK8法检测细胞存活率, 通过ALP活性检测H2 O2对细胞成骨能力的影响, 化学荧光法检测细胞内活性氧水平; 使用Calcitriol预处理细胞, 检测细胞存活率, ALP活性和细胞内活性氧水平, 观察其对H2 O2刺激造成的氧化应激成骨损伤的作用; 使用qPCR检测RUNX2和BMP9基因mRNA在H2 O2和 (或) Calcitriol处理后的变化; 使用Western印迹检测p53/p21表达和磷酸化β-cate-nin水平的变化.结果 H2O2 (200 μmol/L) 能够诱导C3 H10 T1/2细胞存活率降低 [ (0.45 ± 0.07) vs. (1 ± 0.19), P<0.05], ALP活性降低 [ (3 230.03 ± 389.14) vs. (6 361.85 ± 688.42), P<0.01], 细胞内活性氧升高; Calcitriol预处理能够缓解H2 O2诱导的细胞存活率降低 [ (0.8 ± 0.08) vs. (0.54 ± 0.06), P<0.05], ALP活性降低 [ (9 983.36 ± 407.37) vs. (4 828.47 ± 299.3), P<0.001] 和活性氧升高; Cal-citriol预处理能够恢复被H2 O2损伤而降低的RUNX2和BMP9 mRNA的表达水平; H2 O2刺激使得p53/p21表达显著增加, Calcitriol预处理则可以逆转这一效果, 并且激活β-catenin Ser552位点的磷酸化.结论 Calcit-riol至少部分通过p53/p21途径缓解H2 O2诱导的间充质干细胞氧化应激和成骨功能损伤, Wnt/β-catenin通路的激活可能在其中起作用.
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