【摘 要】
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目的:探究miR-145影响鼻咽癌细胞增殖可能的机制。方法:采用Real-time PCR法检测鼻咽癌细胞株CNE-1、CNE-2、CNE-2Z和鼻咽部永生化上皮细胞株NP69中miR-145和c-Myc的mRNA表达
【机 构】
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苏州大学基础医学与生物科学学院遗传学系; 苏州大学癌症分子遗传学实验室; 苏州大学附属第一医院耳鼻喉科;
【基金项目】
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江苏省高校自然科学基金资助项目(No.14KJB310017);苏州市国际科技合作计划国际技术引进与合作创新基金资助项目(No.SH201209)~~
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目的:探究miR-145影响鼻咽癌细胞增殖可能的机制。方法:采用Real-time PCR法检测鼻咽癌细胞株CNE-1、CNE-2、CNE-2Z和鼻咽部永生化上皮细胞株NP69中miR-145和c-Myc的mRNA表达水平,Western blotting法检测c-Myc的蛋白表达水平,双萤光素酶报告基因实验检测miR-145与基因c-Myc的关系。分别将miR-Negative control、miR-145 mimics和siNC、si-c-Myc转染进入CNE-1细胞,采用Real-time PCR及Western blotting法检测转染效果,CCK-8法检测转染后细胞的增殖情况,以及碘化丙啶(IP)染色流式细胞术检测细胞周期情况。结果:miR-145在鼻咽癌细胞系中明显低表达。转染miR-145后明显抑制CNE-1细胞的增殖[3 d:(1.03±0.02)vs(1.21±0.02),P<0.05];[4 d:(1.79±0.02)vs(2.09±0.07),P<0.01]和导致G1期阻滞[(79.57±1.47)%vs(69.98±1.16)%,P<0.05]。miR-145可以直接作用于c-Myc的3’UTR区域,抑制c-Myc的转录和表达。c-Myc下调可明显抑制CNE-1细胞的增殖[3 d:(0.80±0.02)vs(1.02±0.01),P<0.01];[4 d:(1.68±0.4)vs(1.92±0.07),P<0.01],并致G1期阻滞[(63.73±1.81)%vs(54.10±2.26)%,P<0.05]。结论:miR-145通过靶向作用于c-Myc的3’UTR区来抑制鼻咽癌细胞的增殖,对更深入探索鼻咽癌的诊断和治疗有着重要意义。
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