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摘要：目的：分析莱菔硫烷对鼻咽癌细胞中Klf4表达及侵袭迁移能力的影响。方法：将鼻咽癌细胞株HONE1分成A、B两组，A组正常培养，B组予以梯度浓度的莱菔硫烷处理，运用CCK8试验检测细胞存活率;取50%半数抑制浓度莱菔硫烷处理的鼻咽癌细胞株HONE1，运用免疫荧光技术检测Klf4，运用划痕试验与Transwell试验观察细胞侵袭迁移能力。结果：1～20μmol/L浓度莱菔硫烷处理下的细胞存活率出现逐渐下降的趋势，且均低于0μmol/L浓度莱菔硫烷处理下的细胞存活率，P<0.05。B组细胞质中Klf4a的荧光强度较A组明显增强。B组的侵袭细胞数较A组明显减少，细胞迁移速率较A组明显降低。结论：莱菔硫烷可引起鼻咽癌细胞质中Klf4的聚集，且能降低其侵袭迁移能力。
关键词：莱菔硫烷;鼻咽癌;Klf4;侵袭迁移能力
【中图分类号】R246.5 【文獻标识码】A 【文章编号】1673-9026（2021）03-078-02
鼻咽癌是我国广东、广西及湖南的一种高发恶性肿瘤，患病率位居耳鼻咽喉恶性肿瘤首位[1]。临床实践表明，鼻咽癌具有较高的侵袭性与转移性，应及早诊治，以控制病情发展，改善预后[2]。莱菔硫烷是一种从西蓝花中提取的植物化学物，有抑制肿瘤细胞繁殖、加速死亡、保护细胞正常功能的作用。本文就莱菔硫烷对鼻咽癌细胞中Klf4表达及侵袭迁移能力的影响展开分析，旨在明确莱菔硫烷的抗癌作用以及KIf4在鼻咽癌发生与发展中的作用机制，汇报如下：
1 资料和方法
1.1 一般资料
鼻咽癌细胞株HONE1源于本院肿瘤研究所标本库，经复苏、传代培养而成。
1.2 方法
1.2.1 仪器和试剂
莱菔硫烷源于陕西斯诺特生物技术有限公司，Klf4抗体源于美国Cell signaling公司，CCK8试剂盒源于上海晶抗生物公司，抗兔二抗（北京中杉金桥生物技术有限公司）;RMPI-1640培养基，培养瓶（CORNING公司），SDS-PAGE电泳仪。
1.2.2 细胞处理方法
A组正常培养，B组予以梯度浓度（0、1、5、10、15、20μmol/L）的莱菔硫烷处理。
1.2.3 CCK8试验检测方法
制备细胞悬液，计数后接种于96孔板，每孔100μL，37℃培养箱内培养3h，加入梯度浓度莱菔硫烷处理3d，重复操作3次。加入10μL的CCK8，培养4h，测定490nm吸光度值，参比波长650nm。检测细胞存活率，计算公式为（加药组吸光度值-对照组吸光度值）×100%。
1.2.4 划痕试验及Transwell试验方法
取50%半数抑制浓度莱菔硫烷处理的鼻咽癌细胞株HONE1进行试验。将1×105个细胞接种于12孔板中，过夜，铁壁，划痕，换培养基，培养24h，显微镜下观察细胞的侵袭迁移能力，以细胞的迁移速率与侵袭细胞数进行评估。
1.2.5 免疫荧光技术检测方法
取50%半数抑制浓度莱菔硫烷处理的鼻咽癌细胞株HONE1进行Klf4检测。细胞消化离心处理，重悬，于6孔细胞培养板中行细胞爬片，完全贴壁后取出培养板，磷酸缓冲盐溶液冲洗，多聚甲醛室温下固定20min，体积分数0.2% Triton X-100破膜，血清封闭0.5h，一抗4℃湿盒内过夜，二抗孵育2h，以4'，6-二脒基-2-苯基吲哚染核，甘油封片，正置共聚焦荧光显微镜下观察。
1.3 观察指标
（1）对比不同浓度莱菔硫烷处理下的细胞存活率;（2）对比A、B组细胞质中Klf4的检测结果。（3）对比A、B组的细胞侵袭迁移能力。
1.4 数据处理
运用SPSS22.0软件，计数资料以%表示，行x2检验，P<0.05为差异显著。
2 结果
2.1 不同浓度莱菔硫烷处理下的细胞存活率对比
1～20μmol/L浓度莱菔硫烷处理下的细胞存活率出现逐渐下降的趋势，且均低于0μmol/L浓度莱菔硫烷处理下的细胞存活率，P<0.05，见表1。
2.2 A、B组细胞质中Klf4的检测结果对比
B组细胞质中Klf4的荧光强度较A组明显增强，见图1。
2.3 A、B组的细胞侵袭迁移能力对比
B组的侵袭细胞数较A组明显减少，细胞迁移速率较A组明显降低，见图2、3。
3 讨论
Klf4是一种锌指转录因子，在各种不同肿瘤研究中报道其具有肿瘤抑制功能[3]。细胞质中Klf4的低水平表达是鼻咽癌患者一个潜在的不利预后因素。莱菔硫烷在肿瘤作用已得到诸多研究报道的证实，口服可提高解毒酶活性，预防癌症进展。当前认为，莱菔硫烷是靶向肿瘤肝细胞的植物提取物，但其作用机制尚不明确，有待进一步探讨。
本研究结果显示，莱菔硫烷处理下的鼻咽癌细胞存活率明显降低，细胞质中Klf4的荧光强度明显增强，侵袭细胞数明显减少，细胞迁移速率明显降低，提示莱菔硫烷可提高鼻咽癌细胞质中Klf4的表达水平，并降低细胞侵袭迁移能力。
综上所述，莱菔硫烷可引起鼻咽癌细胞质中Klf4的聚集，且能降低其侵袭迁移能力。
参考文献：
[1]李志伟，缪琴，王为.滋养层细胞表面抗原2和DNA甲基转移酶1在鼻咽癌中的表达及与其临床病理特征的相关性分析[J].解放军医药杂志，2020，32（05）：48-51.
[2]王志强，贺璇，李思维，等.Yes相关蛋白、哺乳动物不育系20样激酶1、细胞周期蛋白D1在鼻咽癌中的表达及临床意义[J].中国现代医学杂志，2019，29（9）：39-43.
[3]李锡清，赵尊兰，刘冬玲，等.莱菔硫烷对鼻咽癌细胞中Klf4表达及侵袭迁移能力的影响[J].中华实用诊断与治疗杂志，2017，31（8）：739-743.
基金项目：广西高校中青年教师基础能力提升项目（编号：2018KY0412）
桂林医学院第二附属医院 541199
关键词：莱菔硫烷;鼻咽癌;Klf4;侵袭迁移能力
【中图分类号】R246.5 【文獻标识码】A 【文章编号】1673-9026（2021）03-078-02
鼻咽癌是我国广东、广西及湖南的一种高发恶性肿瘤，患病率位居耳鼻咽喉恶性肿瘤首位[1]。临床实践表明，鼻咽癌具有较高的侵袭性与转移性，应及早诊治，以控制病情发展，改善预后[2]。莱菔硫烷是一种从西蓝花中提取的植物化学物，有抑制肿瘤细胞繁殖、加速死亡、保护细胞正常功能的作用。本文就莱菔硫烷对鼻咽癌细胞中Klf4表达及侵袭迁移能力的影响展开分析，旨在明确莱菔硫烷的抗癌作用以及KIf4在鼻咽癌发生与发展中的作用机制，汇报如下：
1 资料和方法
1.1 一般资料
鼻咽癌细胞株HONE1源于本院肿瘤研究所标本库，经复苏、传代培养而成。
1.2 方法
1.2.1 仪器和试剂
莱菔硫烷源于陕西斯诺特生物技术有限公司，Klf4抗体源于美国Cell signaling公司，CCK8试剂盒源于上海晶抗生物公司，抗兔二抗（北京中杉金桥生物技术有限公司）;RMPI-1640培养基，培养瓶（CORNING公司），SDS-PAGE电泳仪。
1.2.2 细胞处理方法
A组正常培养，B组予以梯度浓度（0、1、5、10、15、20μmol/L）的莱菔硫烷处理。
1.2.3 CCK8试验检测方法
制备细胞悬液，计数后接种于96孔板，每孔100μL，37℃培养箱内培养3h，加入梯度浓度莱菔硫烷处理3d，重复操作3次。加入10μL的CCK8，培养4h，测定490nm吸光度值，参比波长650nm。检测细胞存活率，计算公式为（加药组吸光度值-对照组吸光度值）×100%。
1.2.4 划痕试验及Transwell试验方法
取50%半数抑制浓度莱菔硫烷处理的鼻咽癌细胞株HONE1进行试验。将1×105个细胞接种于12孔板中，过夜，铁壁，划痕，换培养基，培养24h，显微镜下观察细胞的侵袭迁移能力，以细胞的迁移速率与侵袭细胞数进行评估。
1.2.5 免疫荧光技术检测方法
取50%半数抑制浓度莱菔硫烷处理的鼻咽癌细胞株HONE1进行Klf4检测。细胞消化离心处理，重悬，于6孔细胞培养板中行细胞爬片，完全贴壁后取出培养板，磷酸缓冲盐溶液冲洗，多聚甲醛室温下固定20min，体积分数0.2% Triton X-100破膜，血清封闭0.5h，一抗4℃湿盒内过夜，二抗孵育2h，以4'，6-二脒基-2-苯基吲哚染核，甘油封片，正置共聚焦荧光显微镜下观察。
1.3 观察指标
（1）对比不同浓度莱菔硫烷处理下的细胞存活率;（2）对比A、B组细胞质中Klf4的检测结果。（3）对比A、B组的细胞侵袭迁移能力。
1.4 数据处理
运用SPSS22.0软件，计数资料以%表示，行x2检验，P<0.05为差异显著。
2 结果
2.1 不同浓度莱菔硫烷处理下的细胞存活率对比
1～20μmol/L浓度莱菔硫烷处理下的细胞存活率出现逐渐下降的趋势，且均低于0μmol/L浓度莱菔硫烷处理下的细胞存活率，P<0.05，见表1。
2.2 A、B组细胞质中Klf4的检测结果对比
B组细胞质中Klf4的荧光强度较A组明显增强，见图1。
2.3 A、B组的细胞侵袭迁移能力对比
B组的侵袭细胞数较A组明显减少，细胞迁移速率较A组明显降低，见图2、3。
3 讨论
Klf4是一种锌指转录因子，在各种不同肿瘤研究中报道其具有肿瘤抑制功能[3]。细胞质中Klf4的低水平表达是鼻咽癌患者一个潜在的不利预后因素。莱菔硫烷在肿瘤作用已得到诸多研究报道的证实，口服可提高解毒酶活性，预防癌症进展。当前认为，莱菔硫烷是靶向肿瘤肝细胞的植物提取物，但其作用机制尚不明确，有待进一步探讨。
本研究结果显示，莱菔硫烷处理下的鼻咽癌细胞存活率明显降低，细胞质中Klf4的荧光强度明显增强，侵袭细胞数明显减少，细胞迁移速率明显降低，提示莱菔硫烷可提高鼻咽癌细胞质中Klf4的表达水平，并降低细胞侵袭迁移能力。
综上所述，莱菔硫烷可引起鼻咽癌细胞质中Klf4的聚集，且能降低其侵袭迁移能力。
参考文献：
[1]李志伟，缪琴，王为.滋养层细胞表面抗原2和DNA甲基转移酶1在鼻咽癌中的表达及与其临床病理特征的相关性分析[J].解放军医药杂志，2020，32（05）：48-51.
[2]王志强，贺璇，李思维，等.Yes相关蛋白、哺乳动物不育系20样激酶1、细胞周期蛋白D1在鼻咽癌中的表达及临床意义[J].中国现代医学杂志，2019，29（9）：39-43.
[3]李锡清，赵尊兰，刘冬玲，等.莱菔硫烷对鼻咽癌细胞中Klf4表达及侵袭迁移能力的影响[J].中华实用诊断与治疗杂志，2017，31（8）：739-743.
基金项目：广西高校中青年教师基础能力提升项目（编号：2018KY0412）
桂林医学院第二附属医院 541199